大鼠腦內(nèi)注射Aβ1-42后PPARγ與炎癥因子表達(dá)相關(guān)性及積雪草苷干預(yù)研究.pdf

1、目的:過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferator activatedreceptor，PPAR)參與了體內(nèi)脂代謝、糖穩(wěn)態(tài)、炎癥反應(yīng)、凋亡等多種生理反應(yīng)，PPAR表達(dá)或激活在神經(jīng)元退變病變中也發(fā)揮重要的保護(hù)作用。本研究通過(guò)觀察在大鼠腦內(nèi)注射β淀粉樣蛋白1-42(β-amyloid1-42，Aβ1-42)后PPARγ及炎癥因子表達(dá)情況以及大鼠行為學(xué)改變，分析PPARγ與炎癥因子表達(dá)與大鼠空間記憶能力相關(guān)性。同

2、時(shí)給予積雪草苷干預(yù)，觀察積雪草苷對(duì)大鼠腦內(nèi)注射Aβ1-42后大鼠行為學(xué)改變以及PPARγ與炎癥因子表達(dá)影響，探索積雪草苷防治AD疾病研究的新的作用機(jī)制。
　　方法:(1)分組與給藥:70只SD大鼠隨機(jī)分為陰性對(duì)照組、模型組，假手術(shù)對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照組，積雪草苷5 mg/kg，15mg/kg，45mg/kg組。模型制作方法為將β-淀粉樣蛋白(Aβ1-42)10μg(1μL)注入大鼠雙側(cè)海馬CA1區(qū)。積雪草苷組造模前2小時(shí)第一次灌胃給藥

3、，假手術(shù)對(duì)照組和模型組灌胃等體積生理鹽水，陽(yáng)性對(duì)照組給予多奈哌齊1mg/kg。每天上午灌胃給藥1次，連續(xù)2周。
　　(2)大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力檢測(cè):通過(guò)Morris水迷宮法進(jìn)行大鼠定位航行試驗(yàn)與空間搜索實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力。大鼠在造模第2周后進(jìn)行檢測(cè)。1.定位航行實(shí)驗(yàn):第一天大鼠自由游泳2分鐘，第二天起每天一次，每次四個(gè)象限各訓(xùn)練1次，取平均值，連續(xù)4d，記錄大鼠尋找并爬上平臺(tái)所需時(shí)間（逃避潛伏期）;2.空間搜索實(shí)驗(yàn):第

4、5天撤除平臺(tái)，記錄2 min內(nèi)大鼠跨過(guò)平臺(tái)相應(yīng)位置的次數(shù)。(3)免疫組化檢測(cè)海馬組織Aβ1-42表達(dá):大鼠處死后取海馬組織制成石蠟切片。常規(guī)脫蠟，通過(guò)免疫組化法觀察Aβ1-42表達(dá)情況。軟件image-pro plus6.0測(cè)量圖片上黃色部分的累積光密度(IOD)，比較各組IOD值。(4)ELISA法檢測(cè)海馬組織IL-6，TNF-α，IL-1:處死大鼠后冰上取出右側(cè)海馬，檢測(cè)海馬組織中IL-6，TNF-α，IL-1表達(dá)情況。(5)wes

5、tern-blot檢測(cè)PPARγ蛋白表達(dá):以β-actin為內(nèi)參，通過(guò)免疫印跡法檢測(cè)PPARγ蛋白表達(dá)量，蛋白條帶吸光度值用Image pro-plus軟件測(cè)定。(6)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:計(jì)量資料采用(X)±S表示，數(shù)據(jù)分析采用單因素方差分析，兩組間比較采用SNK法。P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)用SPSS19.0軟件分析處理。
　　結(jié)果:(1)積雪草苷對(duì)大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力影響:與模型組比較，假手術(shù)對(duì)照組大鼠平均潛伏期明顯縮短

6、，跨越平臺(tái)次數(shù)明顯增加(P＜0.01);陽(yáng)性對(duì)照組平均潛伏期明顯縮短，跨越平臺(tái)次數(shù)明顯增加(P＜0.01);積雪草苷5mg/kg，15mg/kg，45mg/kg組大鼠平均潛伏期縮短，跨越平臺(tái)次數(shù)增加(P＜0.05)。與陽(yáng)性對(duì)照組比較，積雪草苷5mg/kg，15mg/kg，45mg/kg組大鼠平均潛伏期與跨越平臺(tái)次數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。(2)積雪草苷對(duì)大鼠海馬組織Aβ1-42表達(dá)影響:模型組大鼠海馬區(qū)可見(jiàn)Aβ1-42表達(dá)較多，假

7、手術(shù)對(duì)照組幾乎沒(méi)有Aβ1-42表達(dá)，陽(yáng)性對(duì)照組，積雪草苷5 mg/kg，15mg/kg，45mg/kg組可見(jiàn)少量Aβ1-42表達(dá)。與模型組比較，假手術(shù)對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組，積雪草苷5 mg/kg，15mg/kg，45mg/kg組與模型組比較顯著降低(P＜0.01)。(3)大鼠海馬組織PPARγ蛋白表達(dá)及積雪草苷對(duì)PPARγ蛋白影響:模型組海馬組織PPARγ蛋白表達(dá)增加，假手術(shù)對(duì)照組PPARγ蛋白表達(dá)較少，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.

8、05)。積雪草苷5mg/kg組對(duì)PPARγ蛋白表達(dá)無(wú)明顯影響，比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，積雪草苷15mg/kg，45mg/kg組可上調(diào)PPARγ蛋白表達(dá)，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(4)積雪草苷對(duì)大鼠海馬組織IL-6表達(dá)影響:與模型組比較，假手術(shù)對(duì)照組IL-6表達(dá)較低，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)。與模型組比較，積雪草苷5 mg/kg，15mg/kg，45mg/kg組可減少Aβ1-42刺激后海馬組織IL-6含

9、量，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。(5)積雪草苷對(duì)大鼠海馬組織TNF-α表達(dá)影響:與模型組比較，假手術(shù)對(duì)照組TNF-α表達(dá)較低，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)。與模型組比較，積雪草苷5 mg/kg，15mg/kg，45mg/kg組可減少Aβ1-42刺激后海馬組織TNF-α含量，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。(6)積雪草苷對(duì)大鼠海馬組織IL-1表達(dá)影響:與模型組比較，假手術(shù)對(duì)照組IL-1表達(dá)較低，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）。與模型

10、組比較，積雪草苷5 mg/kg，15mg/kg，45mg/kg組可減少Aβ1-42刺激后海馬組織IL-1含量，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　結(jié)論:(1)大鼠腦內(nèi)注射Aβ1-42后大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力下降，PPARγ蛋白表達(dá)增加，炎癥因子IL-6，TNF-α，IL-1表達(dá)增加，提示大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力下降可能與PPARγ蛋白表達(dá)增加，炎癥因子IL-6，TNF-α，IL-1表達(dá)增加有關(guān)。(2)積雪草苷能夠提高上調(diào)PPARγ蛋白表