東南沿海地區(qū)蝙蝠攜帶病毒的初步調(diào)查研究.pdf

1、蝙蝠是數(shù)量僅次于嚙齒類動(dòng)物的翼手目(Chiroptera)類哺乳動(dòng)物，共包含19個(gè)科962種，在全球范圍內(nèi)廣泛分布。蝙蝠攜帶病原種類繁多，其中檢測到病毒137種，涉及人畜共患病病毒61種。值得注意的是這其中包括一些對(duì)人高致病性的病毒，如SARS樣冠狀病毒(SARS-like coronavirus)、埃博拉病毒(Ebola virus)、馬爾堡病毒（Marburg virus）、狂犬病毒(Rabies virus)、登革病毒(Dengu

2、e virus)等。近期研究結(jié)果表明一些新病毒正陸續(xù)從蝙蝠體內(nèi)被發(fā)現(xiàn)，包括肝炎病毒(Hepatitis virus)、呼腸孤病毒(Retrovirus)、博卡病毒(Bocavirus)、圓環(huán)病毒(Circovirus)、星狀病毒(Astrovirus)等均發(fā)現(xiàn)一些新的種。2003年的“非典”疫情，共造成全球8，000多人感染，至少800人死亡，使冠狀病毒在全球范圍內(nèi)引起關(guān)注。2014年西非的埃博拉疫情，導(dǎo)致6，388人喪生，確診或疑似感

3、染病例17，942個(gè)。2016年阿根廷的登革病毒疫情，造成15，000人感染。引發(fā)這幾次疫情的病原有一個(gè)共同的動(dòng)物宿主——蝙蝠。因此，蝙蝠作為自然界貯存病原的巨大病原庫，引起了越來越多科研工作者的關(guān)注。
　　病毒宏基因組學(xué)是在宏基因組學(xué)理論基礎(chǔ)上，結(jié)合傳統(tǒng)病原檢測技術(shù)新興的學(xué)科分支，其應(yīng)用迅速展示出巨大的優(yōu)越性，尤其是在新發(fā)病毒的發(fā)現(xiàn)和預(yù)警方面，突破了傳統(tǒng)方法依賴病毒保守基因序列的局限性。本研究基于病毒宏基因組學(xué)策略，系統(tǒng)分析20

4、15年7-8月從我國東南沿海部分地區(qū)共收集的5種210只蝙蝠。對(duì)采集的蝙蝠的腸和肺組織進(jìn)行高通量測序，對(duì)測序結(jié)果進(jìn)行分類整理，發(fā)現(xiàn)獲得的序列信息共涉及38個(gè)病毒科。其中包括16個(gè)脊椎動(dòng)物病毒科、4個(gè)植物病毒科、5個(gè)昆蟲病毒科。感染脊椎動(dòng)物的病毒包括冠狀病毒科（Coronaviridae）、腺病毒科(Adenoviridae)、皰疹病毒科（Herpesviridae）、雙小RNA病毒科（Picornaviridae）、逆轉(zhuǎn)錄病毒科（Ret

5、roviridae）、非洲豬瘟樣病毒病毒科(Asfarviridae)、星狀病毒科（Astroviridae）、杯狀病毒科（Caliciviridae）;圓環(huán)病毒科（Circoviridae）、肝炎病毒科（Hepeviridae）、乳頭瘤病毒科（Papillomaviridae）、細(xì)小病毒科（Parvoviridae）、呼腸孤病毒科（Retroviridae）;黃病毒科（Flaviviridae）、痘病毒科（Poxviridae）和披膜

6、病毒科（Togaviridae）。通過序列分析比較發(fā)現(xiàn)，不同地區(qū)和不同蝙蝠種類在注釋到的病毒種類、序列方面存在同源性和豐度差異。初步掌握了東南沿海部分地區(qū)蝙蝠攜帶病毒的生態(tài)學(xué)狀況，為下一步驗(yàn)證工作的開展提供了方向。
　　根據(jù)宏基因組注釋信息，選取了圓環(huán)病毒、博卡病毒、軟腐病毒等設(shè)計(jì)簡并引物，應(yīng)用特異性RT-PCR檢測方法，獲取了上述病毒在蝙蝠體內(nèi)和不同地域的攜帶和分布情況。結(jié)果顯示在舟山、岱山、長樂、連江蝙蝠體內(nèi)各檢測到1株圓環(huán)病

7、毒，分別命名為BtCV-ZS62、BtCV-DS13、BtCV-CL6、BtCV-LJ22;在岱山蝙蝠體內(nèi)檢測到2株博卡病毒，命名為:BtBov-DS9和BtBov-DS10;在廈門蝙蝠體內(nèi)檢測到2株軟腐病毒，命名為BtIFA-XM9和BtIFA-XM10。基于宏基因測序注釋信息，借助已知同源序列保守區(qū)設(shè)計(jì)系列簡并套式引物，經(jīng)反向PCR擴(kuò)增、序列測定和拼接，進(jìn)一步獲得了其中4株圓環(huán)病毒的全基因序列(1，873bp、1，910bp、2，0

8、51bp、1，806bp)和1株博卡病毒的大部分序列(3，921bp)。依據(jù)國際病毒分類委員會(huì)(International Committee on Taxonomy of Viruses，ICTV)關(guān)于圓環(huán)病毒新種的判定標(biāo)準(zhǔn)，初步判斷BtCV-ZS62、BtCV-DS13、BtCV-CL6、BtCV-LJ22是四種新的蝙蝠圓環(huán)病毒，屬于圓環(huán)病毒科，圓環(huán)病毒屬。根據(jù)ICTV關(guān)于博卡細(xì)小病毒新種的判定標(biāo)準(zhǔn)，初步判斷BtBov-DS10是一

9、株全新的博卡細(xì)小病毒。
　　在獲得上述病毒基因組信息基礎(chǔ)上，選取圓環(huán)病毒、博卡病毒進(jìn)行重組結(jié)構(gòu)蛋白制備和血清流行病學(xué)初步分析，選擇結(jié)構(gòu)蛋白BtB OV-DS10-NP和BtCV-DS13-Cap進(jìn)行原核表達(dá)和純化，探索從血清學(xué)水平初步驗(yàn)證蝙蝠攜帶病毒情況，以期完善病毒感染的流行病學(xué)證據(jù)鏈。
　　我國蝙蝠種類豐富，有7科130種，分布廣泛，其生態(tài)圈與人類活動(dòng)圈有較大交叉。因此開展我國蝙蝠攜帶病毒的自然本底調(diào)查對(duì)于預(yù)防新發(fā)傳染病