表面等離子體共振用于磺胺甲噁唑與血清白蛋白作用研究.pdf

1、表面等離子共振檢測技術(shù)，是一種無需標(biāo)記、無需分離純化并能在線實時監(jiān)測生物分子相互作用、可確定反應(yīng)物種類和濃度的檢測技術(shù)，由于具有靈敏度高、所需試樣少、樣品無需標(biāo)記及檢測速度快等特點，被廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)療、環(huán)境等監(jiān)測領(lǐng)域。自從Liedberg等將SPR技術(shù)用于化學(xué)傳感器研究領(lǐng)域以來，SPR傳感器逐漸成為國際傳感器領(lǐng)域的研究熱點。主要應(yīng)用于研究生物大分子之間的相互作用，可得到反應(yīng)物分子之間每一步的鍵合信息，測定動力學(xué)常數(shù)，在生物科學(xué)領(lǐng)域應(yīng)

2、用中取得了長足進展。
　　 隨著醫(yī)療水平的不斷提高，在篩選藥物時藥物的蛋白結(jié)合水平成為一項重要的影響因素。本文內(nèi)容為基于SPR技術(shù)研究藥物與蛋白質(zhì)的相互作用。主要研究內(nèi)容包括：
　　 1.SPR傳感器直接測定BSA與SMZ的相互作用。采用自行組裝的SPR裝置，使用MPA作為基底膜，將BSA偶聯(lián)固定在傳感芯片上。采用系列濃度SMZ溶液進樣法，將不同濃度的藥物流經(jīng)傳感芯片來構(gòu)建進樣曲線。結(jié)合過程可以看成傳感器表面的單分子層結(jié)

3、合，SMZ與BSA為1:1結(jié)合，該結(jié)合可以視為準(zhǔn)一級反應(yīng)，求得結(jié)合常數(shù)KA=1.250×105。
　　 2.基于生物素和親和素間的高度特異性結(jié)合力、橋聯(lián)作用以及放大作用，將生物素-親和素系統(tǒng)用于表面等離子體共振生物傳感器。首先運用DCC法合成N-羥基琥珀酰亞胺生物素酯，測其熔點為210～213 ℃，通過紅外光譜和核磁共振譜進行表征，用合成的BNHS標(biāo)記BSA。在芯片表面通過自組裝將MPA固定，作為基底膜，在該基底膜上依次組裝親和

4、素、BNHS標(biāo)記的BSA，形成以BSA為表面的生物傳感器，該傳感器表面可以結(jié)合SMZ，并實現(xiàn)對SMZ的測定。以響應(yīng)信號對濃度作圖，得到擬合曲線y=1.236×102 x－2.286，與SMZ與BSA直接作用的擬合曲線y＝30.88x＋0.7300相比，信號明顯增強，線性關(guān)系增大。
　　 3.SPR傳感器直接測定HSA與SMZ的相互作用。采用自行組裝的SPR裝置，使用MPA作為基底膜，將HSA偶聯(lián)固定在芯片上。采用系列濃度SMZ溶

5、液進樣法，將不同濃度的藥物流經(jīng)傳感芯片來構(gòu)建進樣曲線。結(jié)合過程可以看成傳感器表面的單分子層結(jié)合，SMZ與HSA為1:1結(jié)合，該結(jié)合可以視為準(zhǔn)一級反應(yīng)，求得結(jié)合常數(shù)KA=1.044×105。
　　 4.將生物素-親和素系統(tǒng)引入SPR技術(shù)檢測HSA與SMZ的相互作用。用合成的BNHS標(biāo)記HSA。通過自組裝將MPA固定在傳感芯片表面，作為基底膜，在該基底膜上依次組裝親和素、BNHS標(biāo)記的HSA，傳感器表面可以結(jié)合SMZ，并實現(xiàn)對SMZ