手足口病患者的實驗室指標、病原體分析及分子機制研究.pdf

1、目的：
　　1.調查2015年4月-7月在鄭州市某兒童醫(yī)院住院的手足口病患者的臨床體征、實驗室檢查資料，并比較分析輕、重癥患者實驗室指標的差異，為臨床檢測患者的重癥化提供依據。
　　2.通過描述臨床分離的EV71病毒的病原體分子特征，并分析比較輕、重癥手足口病患者的EV71編碼區(qū)特征的差異性，從病原體的角度探討病原體引起手足口病重癥化的原因。
　　3.探討EV71感染RD細胞后細胞內發(fā)生的氧化應激與細胞因子水平變化的關

2、系。
　　方法：
　　1.采用問卷調查對187例手足口病患者的一般情況和實驗室指標進行收集，利用單因素及多因素分析輕、重癥手足口病患者差異分布的實驗室指標。
　　2.從GenBank數據庫收集經全基因組測序的EV71病毒共748株，通過文獻檢索最終篩選有明確臨床特征的共230株。然后通過生物信息學軟件進行230株EV71的分子特征分析，并進行差異位點的統計分析和二級結構及結構域的特點描述。
　　3.通過檢測比較E

3、V71感染RD細胞0h、12h、24h、48h后的細胞內的活性氧水平來判斷氧化應激的發(fā)生，然后通過Westernblot檢測細胞內的磷酸化、未磷酸化NF-kappaB和IkBα的蛋白水平變化，ELISA檢測細胞培養(yǎng)上清中IL-6和TNF-α等炎性因子的表達。
　　結果：
　　1.輕、重癥手足口病患兒的中性細胞比率、淋巴細胞比率、IgM、降鈣素原均隨時間動態(tài)變化（P<0.05）；中性細胞比率（OR=1.198，P=0.001）

4、、淋巴細胞比率（OR=1.194，P=0.002）、白細胞個數（OR=0.916，P=0.024）、血清鈉離子（OR=0.690，P<0.001）是手足口病患兒重癥化結局的影響或預警實驗室指標。
　　2.共搜集到103株輕癥和127株重癥EV71型手足口病病人的病毒，以C4基因型為主，主要分布于亞太地區(qū)。分離于同一時間和地區(qū)的病毒之間的相似性較大，而分離于不同時間和地區(qū)的病毒相似性較小，遺傳距離較遠。輕癥來源的EV71病毒之間的V

5、P1氨基酸序列同源性為96％-100%，重癥來源的病毒之間的VP1氨基酸序列同源性為94-100%，而輕癥和重癥來源的病毒之間同源性為92%-100%；輕、重癥病毒有41個氨基酸差異位點分布有統計學差異（P<0.05），P3蛋白區(qū)域變異最大，有26個氨基酸差異位點（P<0.001）；蛋白質二級結構及非二級結構分別有21和20個氨基酸差異位點的分布，結構域未見差異位點的分布。
　　3.EV71感染RD細胞24h、48h后與0h相比，

6、細胞內活性氧水平的變化有統計學差異(P<0.05)；而且48h后NF-kappaB被激活轉運到細胞核內部的水平增加(P=0.0394).，與0h組即未感染空白對照組相比，感染12h、24h、48h后RD細胞中的IL-6細胞因子的水平均有明顯升高，差異具有統計學意義(P<0.05).；感染48h后RD細胞中的TNF-α的水平相比較感染0h組有一定的升高，差異具有統計學差異(P<0.05)，而感染12h、24h組與感染0h組的TNF-α水平