香豆素類化合物對小鼠2型糖尿病的干預作用及機制研究.pdf

1、目的:通過長期高脂飲食輔以腹腔注射小劑量鏈脲佐菌素，誘導建立小鼠2型糖尿病模型，使用三種香豆素類化合物進行干預，探究香豆素類化合物的抗糖尿病作用及可能機制。
　　方法:ICR小鼠高脂飲食6周后，連續(xù)腹腔注射30mg/kg STZ5天，3天后檢測小鼠空腹血糖，將空腹血糖≧11.1mmol/L視為造模成功，將其分為模型組、蛇床子素組、秦皮甲素組、秦皮素組和二甲雙胍陽性對照組，分別給予對應藥物5周，正常組進行普通飲食6周后，注射生理鹽水

2、5天，并給予藥物溶劑的對照處理。從藥效學角度考察:(1)小鼠空腹體重、空腹血糖、胰島素水平、胰島素抵抗指數(shù)以及糖耐量的變化;(2)小鼠血脂變化;(3)胰腺及肝臟的GPx、CAT和SOD水平;(4)HE染色，觀察肌肉、肝臟、脂肪、胰腺和腎臟組織病理變化，評價香豆素類化合物對2型糖尿病的干預效果。從分子水平考察作用機制:(1)利用Western Blot考察骨骼肌組織中GLUT4、Akt、p-Akt(Ser473)、TBC1D1、p-TBC

3、1D1(Ser237)和AMPK、p-AMPK(Thr172)等蛋白表達;(2)利用Western Blot分析脂肪組織中GLUT4和AMPK、p-AMPK(Thr172)表達水平，探究香豆素類化合物對2型糖尿病的干預機制。
　　結果:1、香豆素類化合物的藥效學考察:(1)蛇床子素、秦皮甲素和二甲雙胍顯著降低2型糖尿病小鼠空腹血糖和HOMA-IR指數(shù)，并提高胰島素水平，改善小鼠糖耐量，而秦皮素僅提高了胰島素水平，這三種香豆素類化合

4、物并未顯著減輕患病小鼠體重;(2)蛇床子素顯著降低了糖尿病小鼠的T-CHO、TG和NEFA水平，秦皮甲素顯著降低了T-CHO和NEFA水平，而秦皮素僅對NEFA有顯著降低作用;(3)蛇床子素和秦皮甲素對胰腺表現(xiàn)出抗氧化作用，顯著提高了GPx、CAT和SOD活性，而秦皮素僅提高了胰腺CAT活性;三種香豆素類化合物均可顯著提高肝臟GPx、CAT和SOD活性;(4)HE染色觀察:與正常組比較，模型組小鼠骨骼肌肌纖維排列紊亂，核內(nèi)移，排列不整齊

5、，有一定程度萎縮，肝實質細胞由于脂肪積聚而空泡化，肝細胞排列紊亂，肝竇界限不清，脂肪細胞周邊和胰島出現(xiàn)炎癥細胞浸潤的現(xiàn)象。腎小球肥大，系膜和基底膜增厚，上皮細胞排列紊亂。蛇床子素能明顯改善骨骼肌肌纖維排列紊亂和萎縮的現(xiàn)象，秦皮甲素和秦皮素作用不明顯，這三種化合物改善了肝臟組織結構紊亂，降低脂肪在肝細胞積聚，其中蛇床子素作用最為明顯。蛇床子素組的脂肪組織未見炎癥細胞浸潤，但秦皮甲素和秦皮素組改變不明顯。給藥組胰島萎縮和炎癥浸潤現(xiàn)象明顯改善

6、;腎小球結構完整，未見明顯的系膜和基底膜增生，且上皮細胞排列整齊。2、香豆素類化合可以顯著促進Akt和AMPK表達及磷酸化，促進TBC1D1磷酸化和GLUT4轉位。蛇床子素可以上調骨骼肌中AMPK蛋白磷酸化，在脂肪組織中也具有這樣的效果，并激活下游蛋白TBC1D1，或通過促進Akt磷酸化，使得漿GLUT4向細胞膜轉位。秦皮甲素促進骨骼肌細胞AMPK及其底物TBC1D1和Akt磷酸化的效果優(yōu)于蛇床子素，但在脂肪組織中，對AMPK磷酸化沒有