吳茱萸堿對脂多糖誘導(dǎo)的ARDS大鼠的保護作用及機制研究.pdf

1、目的：
　　探討吳茱萸堿(Evodiamine,EVO)對脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）誘導(dǎo)的急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）大鼠的保護作用及分子機制。
　　方法：
　　1.按照隨機數(shù)字表法將72只成年雄性SD大鼠隨機分為正常對照組（氣管滴注生理鹽水）、EVO單獨處理組（氣管滴注1mg/kg EVO）、LPS模型組（氣管滴注3mg/kg LPS）和EVO治療組（氣管滴注1mg/kg EVO和3mg

2、/kg LPS），每組18只，通過氣管注射LPS（3mg/kg）建立ARDS模型，于建模6h后處死大鼠并收集各組動脈血、肺組織和肺泡灌洗液，通過動脈血氣分析、肺濕/干重比值、蘇木精-伊紅染色（HE染色）觀察各組大鼠肺組織的損傷情況；利用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）和實時定量反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（qPCR）的方法檢測肺組織和肺泡灌洗液（BALF）中炎癥介質(zhì)（TNF-α、IL-1β、HMGB1、IL-6）分泌水平；使用Western Bl

3、ot方法測量各組肺組織中NF-βB信號通路相關(guān)蛋白（p50、p65）的表達。
　　2.體外培養(yǎng)巨噬細胞系RAW264.7細胞，細胞經(jīng)LPS（10μg/ml）單獨刺激或LPS（10μg/ml）與EVO（50μM）聯(lián)合作用后，于不同時間點收集各組細胞的培養(yǎng)上清及細胞團塊。通過ELISA法檢測細胞上清中炎癥介質(zhì)（TNF-α、IL-1β、HMGB1、IL-6）的含量及細胞核中NF-kB p65 DNA的結(jié)合活性；利用Western Blo

4、t檢測各組細胞核內(nèi)NF-κB家族蛋白（p50、p65）的表達。
　　結(jié)果：
　　1. LPS刺激6h后，大鼠精神不振、蜷縮少動、呼吸急促，進食減少，但EVO治療組中大鼠的精神和活動狀態(tài)較LPS模型組有明顯好轉(zhuǎn)。與LPS模型組相比較， EVO治療后可明顯減輕LPS所導(dǎo)致的肺水腫和組織病理學(xué)損傷，改善氧合功能，同時降低肺組織和BALF中炎癥介質(zhì)（TNF-α、IL-1β、HMGB1、IL-6）的水平，Western Blot結(jié)果顯

5、示EVO對LPS作用下肺組織胞核中NF-κBp65和p50的高表達具有明顯的下調(diào)作用。
　　2.體外實驗中，LPS活化的RAW264.7細胞經(jīng)EVO干預(yù)后，上清液中炎癥介質(zhì)（TNF-α、IL-1β、HMGB1、IL-6）含量顯著降低，細胞核內(nèi)NF-κB p50和p65表達顯著減少，同時NF-κB p65的DNA結(jié)合活性明顯受抑制。
　　結(jié)論：
　　1. EVO可有效減輕LPS誘導(dǎo)的ARDS大鼠肺組織損傷。
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