鯉魚卵半胱氨酸蛋白酶抑制劑的分離純化、部分性質(zhì)分析和基因克隆.pdf

1、半胱氨酸蛋白酶抑制劑( cystatin protease inhibitor,CPI)是一類分子量較小、能夠抑制半胱氨酸內(nèi)肽酶的天然蛋白酶抑制劑。在機(jī)體免疫防御機(jī)制方面發(fā)揮重要的作用。廣泛地存在于動物、植物及微生物中。CPIs在醫(yī)藥、食品加工、植物抗蟲抗病及寄生蟲的免疫逃避機(jī)制等領(lǐng)域中擁有潛在的使用價值。鯉魚(Cyprinus carpio)屬于鯉科鯉屬的脊椎動物，本課題以鯉魚卵為實(shí)驗(yàn)材料，通過生物化學(xué)與分子生物學(xué)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，分析了蛋

2、白酶抑制劑的抑制活性。分離純化獲得一種半胱氨酸蛋白酶抑制劑，并對其蛋白酶抑制活性及理化性質(zhì)進(jìn)行了研究。文章主要內(nèi)容和結(jié)果如下：
　　選取了五種蛋白酶(凝血酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶和胰凝乳蛋白酶)及其特異性發(fā)色底物利用比色法檢測它們對四種常見魚卵(鯉魚、鰱魚、青魚和鱸魚)的蛋白酶抑制活性，結(jié)果顯示除胰凝乳蛋白酶和木瓜蛋白酶外，對其余3種蛋白酶都具有較好的抑制效果，說明四種魚卵中確實(shí)存在有效的蛋白酶抑制劑；利用Seph

3、adex G50、Sephadex G75凝膠過濾、反相高效液相等生物技術(shù)方法從鯉魚卵中分離純化出了一個純化倍數(shù)為117倍的蛋白；分別檢測了鯉魚卵蛋白酶抑制劑的熱穩(wěn)定性和酸堿穩(wěn)定性，結(jié)果顯示將溫度上升到80℃時，鯉魚卵cystatin則失去抑制活性；而鯉魚卵cystatin酸堿穩(wěn)定性較好。對于嗜水氣單胞菌和枯草芽孢桿菌的抑菌試驗(yàn)則顯示一定程度的抑菌效果。
　　采用RACE方法從鯉魚卵中克隆出了cystatin基因的cDNA序列，基