硫化氫合酶CBS調(diào)控電壓門控性鈉通道參與大鼠自體髓核移植致下肢痛覺過敏的分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　1.初步闡明自體髓核(nucleus pulposus, NP)移植誘導(dǎo)的成年大鼠下肢痛覺過敏中背根神經(jīng)節(jié)(DRG)神經(jīng)元上電壓門控性鈉通道(VGSCs)的表達(dá)和功能的變化特征。
　　2.探討胱硫醚-合成酶（CBS）在下肢痛覺過敏中的作用及其對(duì)電壓門控性鈉通道表達(dá)和功能調(diào)控的影響。
　　方法：
　　1.選擇成年SD雄性大鼠隨機(jī)分為LDH組和Sham組，LDH組在左側(cè)L5、L6背根神經(jīng)節(jié)處以自體尾椎髓核

2、移植來建立大鼠腰椎間盤突出模型，Sham組僅暴露L5、L6神經(jīng)根，其他處理與 LDH組相同。測量兩組大鼠術(shù)前及術(shù)后7天,14天,21天的左后肢機(jī)械刺激縮足反射閾值(PWT)和熱刺激縮足反射閾值(PWL)的變化。鞘內(nèi)注射CBS拮抗劑羧甲基羥胺半鹽酸（AOAA），同樣運(yùn)用以上PWT、PWL測量方法評(píng)測大鼠的下肢疼痛反射閾值，從而檢測CBS在LDH模型中的作用。
　　2.運(yùn)用逆行標(biāo)記的熒光素（DiI）來標(biāo)記支配后肢的L5-L6背根神經(jīng)節(jié)

3、（DRG）中、小神經(jīng)元，運(yùn)用全細(xì)胞膜片鉗方法研究LDH大鼠L5-L6 DRG神經(jīng)元興奮性及電壓門控性鈉通道電流的變化特性。
　　3.運(yùn)用Western Blotting方法檢測大鼠L5-L6 DRG神經(jīng)元中NaV1.7，NaV1.8以及CBS蛋白表達(dá)情況。
　　4.運(yùn)用免疫組織化學(xué)檢測 LDH大鼠 L5-L6 DRG神經(jīng)元中 CBS和 NaV1.7，NaV1.8蛋白共表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.自體髓核移植明

4、顯增加大鼠下肢痛覺過敏，機(jī)械刺激縮足反射閾值(PWT)在術(shù)后1周至3周顯著低于Sham組，1周時(shí)達(dá)到疼痛閾值的最低值,熱刺激縮足反射閾值(PWL)在術(shù)后1周時(shí)顯著降低，2周時(shí)基本恢復(fù)到原基線水平，并且PWT和PWL的顯著降低與CBS的表達(dá)上調(diào)相關(guān)聯(lián)；鞘內(nèi)注射CBS的拮抗劑AOAA后，可以顯著翻轉(zhuǎn)LDH大鼠疼痛閾值，并呈現(xiàn)時(shí)間和劑量依賴性。
　　2.全細(xì)胞膜片鉗記錄顯示，與Sham組相比，LDH組L5-L6 DRG神經(jīng)元興奮性顯著增

5、加；進(jìn)一步檢測顯示自體髓核移植后電壓門控性鈉通道的電流密度顯著增加。
　　3.數(shù)據(jù)分析后顯示，與Sham組相比，LDH組的失活曲線顯著左移，激活曲線沒有顯著變化。另外，自體髓核移植處理后，電壓門控性鈉通道的失活時(shí)間顯著增長，激活時(shí)間沒有顯著變化。
　　4.運(yùn)用免疫組化的實(shí)驗(yàn)方法檢測后發(fā)現(xiàn)CBS與NaV1.7，NaV1.8在L5-L6神經(jīng)元中能夠共表達(dá)。自體髓核移植大鼠L5-L6 DRG神經(jīng)元中NaV1.7和NaV1.8受體蛋

6、白表達(dá)顯著增加，與移植無關(guān)的T10-T12 DRG神經(jīng)元NaV1.7和NaV1.8的蛋白表達(dá)水平?jīng)]有顯著差異。
　　5.連續(xù)鞘內(nèi)注射AOAA可以顯著翻轉(zhuǎn)LDH組大鼠L5-L6相關(guān)DRG神經(jīng)元的興奮性，還可以顯著降低電壓門控性鈉通道的電流密度，并使電壓門控性鈉通道的失活曲線右移。另外AOAA還可以顯著降低LDH組大鼠L5-L6相關(guān)DRG神經(jīng)元中NaV1.7和 NaV1.8的高表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明硫化氫