限食聯(lián)合多不飽和脂肪酸對(duì)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的影響.pdf

1、目的：
　　運(yùn)用析因設(shè)計(jì)旨在觀察限食聯(lián)合多不飽和脂肪酸（Polyunsaturated fatty acids， PUFAs）對(duì)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的影響，并初步闡釋其對(duì)大鼠PPARγ/NF-κB信號(hào)通路的影響。
　　方法：
　　選取40只健康SD雌性大鼠，隨機(jī)分為5組：正常組、模型組、限食組（CR）、5:1PUFAs自由進(jìn)食組（5:1PUFAs+AL）、5:1PUFAs限食組（5:1PUFAs+CR）。正常組、限食組和模

2、型組的大鼠提供普通飼料；5:1PUFAs限食組和5:1PUFAs自由進(jìn)食組的大鼠提供5:1PUFAs配制飼料，限食大鼠的喂食量占自由進(jìn)食的60％。喂養(yǎng)14周后，除正常組外，其余四組均給予5%DSS溶液自由飲用1周制備大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型。所有大鼠3天后處死，剝離出結(jié)腸測(cè)量其長(zhǎng)度并稱重及計(jì)算濕重指數(shù)；觀察大體形態(tài)并進(jìn)行評(píng)分；并用生化法檢測(cè)結(jié)腸組織和血清髓過氧化物酶（MPO）活性；用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）法檢測(cè)結(jié)腸組織中IL-6、I

3、L-2、IL-10和TNF-α水平；用免疫組化法來檢測(cè)結(jié)腸組織中PPARγ、NF-κB p65蛋白的表達(dá)情況；用逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)（RT-PCR）法檢測(cè)結(jié)腸組織中NF-κB p65、PPARγmRNA水平。
　　結(jié)果：
　　1.一般狀況：與自由進(jìn)食的大鼠相比，限食的大鼠體重增長(zhǎng)速度緩慢，尤其是5:1PUFAs限食組體重最輕，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　2.肉眼大體形態(tài)評(píng)分：模型組可見粘膜充血腫脹，結(jié)腸表面有糜爛、出

4、血點(diǎn)及潰瘍，其大體形態(tài)評(píng)分明顯增加，5:1PUFAs限食組上述特征明顯緩解，大體評(píng)分降低（P<0.05）。
　　3.疾病活動(dòng)指數(shù)(DAI)評(píng)分：與正常組比較，模型組DAI評(píng)分較高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組相比，5:1PUFAs限食組評(píng)分降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　4.結(jié)腸長(zhǎng)度、重量及濕重指數(shù)：與正常組相比，模型組結(jié)腸長(zhǎng)度明顯縮短，結(jié)腸重量顯著升高(P<0.05)。與模型組相比，5:1PUF

5、As限食組結(jié)腸長(zhǎng)度增長(zhǎng)，而結(jié)腸重量及濕重指數(shù)下降(P<0.05)。
　　5.結(jié)腸組織病理學(xué)評(píng)分：結(jié)果顯示正常組結(jié)腸黏膜上皮完好，上皮細(xì)胞排列整齊，腺體規(guī)則，無炎性細(xì)胞浸潤，且無充血、水腫和潰瘍的形成；模型組結(jié)腸黏膜上皮脫落，腺體排列錯(cuò)亂，彌漫性炎性細(xì)胞浸潤；與模型組相比，5:1PUFAs限食組炎癥有所改善，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。限食與5:1PUFAs的聯(lián)合作用對(duì)結(jié)腸組織病理學(xué)評(píng)分無交互作用(P>0.05)。
　　

6、6.血清和組織MPO活性：模型組血清和結(jié)腸組織中MPO活性最高，而5:1PUFAs限食組血清和結(jié)腸中MPO活性下降，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。限食與5:1PUFAs的聯(lián)合作用對(duì)血清和組織MPO活性無交互作用(P>0.05)。
　　7.細(xì)胞因子的檢測(cè)：相對(duì)于正常組，模型組大鼠結(jié)腸組織的TNF-α、IL-6水平升高，IL-2、IL-10水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型組相比，5:1PUFAs限食組IL-6、T

7、NF-α水平降低，IL-2、IL-10水平升高(P<0.05)。限食與5:1PUFAs的聯(lián)合作用對(duì)細(xì)胞因子有交互作用(P<0.05)。
　　8.免疫組化的結(jié)果：與正常組相比，模型組大鼠結(jié)腸組織PPARγ表達(dá)降低，NF-κB p65蛋白的表達(dá)水平升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組相比，5:1PUFAs限食組大鼠結(jié)腸組織PPARγ表達(dá)升高，NF-κB p65蛋白的表達(dá)水平降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。限食與5:

8、1PUFAs的聯(lián)合作用對(duì)結(jié)腸組織蛋白表達(dá)NF-κB p65和PPARγ存在交互作用(P<0.05)。
　　9.RT-PCR反應(yīng)的結(jié)果：與正常組相比，模型組大鼠結(jié)腸組織NF-κB p65 mRNA的表達(dá)水平升高，PPARγmRNA表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組相比，5:1PUFAs限食組大鼠結(jié)腸組織NF-κB p65 mRNA表達(dá)水平降低，PPARγmRNA顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。限食與5:

9、1PUFAs的聯(lián)合作用對(duì)結(jié)腸組織PPARγ和NF-κB p65 mRNA表達(dá)存在交互作用(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.葡聚糖硫酸鈉(DSS)是一種人工合成的類肝素硫酸多糖，用5%DSS溶液代替自來水飲用1周成功建立大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型。
　　2.限食聯(lián)合5:1PUFAs對(duì)UC大鼠有保護(hù)作用，可能的作用機(jī)理是與抗氧化損傷和減輕炎癥作用有關(guān)，上調(diào)PPARγ的表達(dá)而負(fù)性調(diào)節(jié)NF-κB的轉(zhuǎn)導(dǎo)，抑制炎癥細(xì)胞募集，從而減