JS-K對人胃癌細胞的抑瘤效應(yīng)及其相關(guān)機制的研究.pdf

1、目的:胃癌是我國的一種常見的消化道惡性腫瘤，由于我國人口眾多且經(jīng)濟社會發(fā)展的不均衡，我國早期胃癌的就診比例比較低，而進展期胃癌的比例很高，這嚴重降低了患者的5年生存率。目前針對進展期胃癌的治療模式主要是D2根治術(shù)聯(lián)合術(shù)后化療。由于臨床常用的化療藥物副作用較大且作用不確定，臨床急需新的治療藥物。JS-K是一種新和成的一氧化氮(NO)前體藥，研究顯示JS-K對多種腫瘤都具有良好的抗腫瘤效應(yīng)，但JS-K在胃癌中的研究尚未見諸報道。
　　

2、方法:在本研究中，我們通過一系列的體外試驗和體內(nèi)試驗，對JS-K在胃癌中的抗腫瘤效應(yīng)進行評估，并對其具體的作用機制進行探討。我們通過MTT試驗、流式細胞儀檢測技術(shù)、線粒體分離技術(shù)、目的蛋白的質(zhì)粒過表達、siRNA、Western blot以及胃癌的皮下移植瘤模型等一系列的生化檢測手段對上述問題進行研究。
　　結(jié)果:JS-K可以通過誘導(dǎo)細胞凋亡對胃癌細胞進行殺傷，且殺傷效果呈時間和劑量依賴性。JS-K誘導(dǎo)胃癌細胞發(fā)生的凋亡是casp

3、ase依賴性的，泛caspase抑制劑Z-VAD-FMK可以完全阻止JS-K上述的殺傷效果，而caspase3的抑制劑Z-DEVD-FMK和caspase9抑制劑Z-LEHD-FMK只能部分地阻止JS-K的殺傷效果。JS-K通過抑制呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ(ComplexⅠ)和復(fù)合體Ⅳ(ComplexⅣ)使胃癌細胞活性氧(ROS)的產(chǎn)生增多，同時又降低SOD1和Catalase這兩種活性氧(ROS)清除蛋白的含量，使活性氧(ROS)在胃癌細胞內(nèi)累

4、積。細胞內(nèi)累積的活性氧(ROS)損傷線粒體的功能，使線粒體膜電位下降(△Ψm)，細胞色素C由線粒體進入細胞質(zhì)，激活caspase9，而活化的caspase9又激活caspase3和剪切PARP從而導(dǎo)致凋亡的發(fā)生。JS-K通過活性氧(ROS)使胃癌細胞發(fā)生凋亡，而活性氧清除劑N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)可以逆轉(zhuǎn)JS-K的上述作用。JS-K可以降低胃癌細胞內(nèi)的抗凋亡蛋白Bc l-2和Bcl-xL的含量，而通過質(zhì)粒過表達Bcl-2和Bcl

5、-xL這兩種蛋白可以保護胃癌細胞免受JS-K的殺傷。通過小干擾RNA(siRNA)技術(shù)，我們發(fā)現(xiàn)凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)和核算內(nèi)切酶G(Endo G)的核轉(zhuǎn)位并不參與JS-K誘導(dǎo)的胃癌細胞發(fā)生的凋亡過程。在體內(nèi)試驗中，JS-K可以很好抑制胃癌皮下瘤體積和質(zhì)量的增長，但對小鼠的體重并不產(chǎn)生明顯的影響，說明其生物耐受性良好。
　　結(jié)論:JS-K可以通過使胃癌細胞累積活性氧(ROS)而損傷線粒體，通過線粒體途徑使胃癌細胞發(fā)生caspase