菝葜提取物的抑菌抗氧化作用以及純化綠原酸和落新婦苷的工藝研究.pdf

1、菝葜是一種具有抑菌、抗腫瘤、降血糖、抗氧化、抗炎鎮(zhèn)痛等多種功能的藥用植物，落新婦苷和綠原酸均是其中重要功能性成分之一。本研究以菝葜為對象，先研究醇提物、石油醚層、氯仿層、乙酸乙酯層、正丁醇層、水層的抗氧化和抑菌試驗，然后從水層和乙酸乙酯層，分離純化綠原酸和落新婦苷。試驗結果如下：
　?。?）采用濾紙片法、最小抑菌濃度、半數(shù)抑菌濃度比較各萃取物的抑菌活性。通過抑菌實驗可知：萃取物均有一定的抑菌活性萃取物，抑菌活性大小為：乙酸乙酯相>

2、正丁醇相>水相>醇提物>石油醚相>氯仿相。其中乙酸乙酯相的抑菌效果最好，當其濃度為80mg/mL時，對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、沙門氏菌和大腸桿菌抑菌圈分別為13.6±0.12、13.2±0.10、12.9±0.07、12.5±0.01（mm）。
　　（2）以BHT為陽性對照，測定菝葜各萃取層，濃度為0.2-1.2mg/mL時，清除·OH、·O2-、·DPPH、·ABTS+能力、總抗氧化能力。通過抗氧化實驗可知：菝葜提取物均具

3、有不同程度的抗氧化活性且與質(zhì)量濃度呈量效關系，乙酸乙酯相的抗氧化活性始終最強。不同極性提取物中抗氧化能力大小為：乙酸乙酯相>正丁醇相>水相>醇提物>石油醚相>氯仿相。乙酸乙酯相清除·OH能力稍弱于BHT，而清除·DPPH、·O2-、·ABTS+能力、總抗氧化能力均強于BHT，當濃度為1.2mg/mL，乙酸乙酯相對·OH、·DPPH、·O2-、·ABTS+清除率分別為58.7％、66.7%、73.1%、93.4%，F(xiàn)RAP值為186±0.

4、21。
　　（3）采用微波提取菝葜中綠原酸，通過單因素和響應面試驗得到了最佳的工藝條件：乙醇體積分數(shù)50%，微波功率300W，液料比30:1（mL/g），微波時間87s，微波溫度48℃，理論綠原酸得率為9.4565mg/g，而實際綠原酸得率平均值為9.3972mg/g，相對誤差為0.627%。
　?。?）對七種大孔樹脂進行篩選，得到最佳樹脂S-8，進一步通過動態(tài)吸附解吸試驗確定其最佳吸附-解析條件為：溶液pH值為2，樹脂用量

5、為1.0g/30mL，解吸液乙醇濃度為50%，上樣濃度為80mg/mL，上樣流速控制在1.0mL/min，洗脫流速1.0mL/min，用量5BV。收集50%乙醇洗脫液，冷凍干燥得到純度為76.47%綠原酸，純化效果較為理想。利用硅膠柱層析對粗提物進行進一步純化。以乙酸乙酯-甲醇進行梯度洗脫，利用薄層層析，收集、合并具有相同位置的斑點，揮干洗脫劑后得到9.85mg淡黃色固體。通過HPLC、MS、NMR鑒定該物質(zhì)為綠原酸。
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6、選用聚酰胺分離純化乙酸乙酯層的落新婦苷，工藝條件為：上樣濃度為80mg/mL，上樣速度為1mL/min，以速度1mL/min，50%乙醇洗脫，收集洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到浸膏，重復兩次。利用硅膠柱層析對粗提物進行進一步純化。以氯仿-甲醇進行梯度洗脫，利用薄層層析，收集、合并具有相同位置的斑點，揮干洗脫劑后得到11.41mg白色固體。通過HPLC、MS、NMR鑒定該物質(zhì)為落新婦苷。
　　綜上得知，菝葜各萃取物均有一定程度的抑菌、抗氧化作