解毒益智方對(duì)阿爾茨海默病轉(zhuǎn)基因線蟲神經(jīng)損傷影響的研究.pdf

1、目的:通過解毒益智方作用于阿爾茨海默病轉(zhuǎn)基因線蟲的研究，觀察線蟲的存活率，癱瘓率及相關(guān)基因表達(dá)量的變化，以明探討解毒益智方對(duì)線蟲神經(jīng)損傷的作用機(jī)制。為藥物進(jìn)入臨床提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:實(shí)驗(yàn)所用的解毒益智方進(jìn)行水提取制成凍干粉以備用，實(shí)驗(yàn)選用轉(zhuǎn)基因Aβ1-42型CL4176秀麗隱桿線蟲作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，經(jīng)同期化處理隨機(jī)分為模型組(0mg/L)、低劑量藥物組(25mg/L)、中劑量藥物組(50mg/L)、高劑量藥物組(100mg/

2、L)。壽命實(shí)驗(yàn)每組50條線蟲，每24小時(shí)對(duì)線蟲死亡數(shù)量進(jìn)行計(jì)數(shù)，根據(jù)線蟲非死亡數(shù)量繪制圖表，并對(duì)四組線蟲進(jìn)行平均壽命、最大壽命進(jìn)行分析。Aβ引起神經(jīng)損傷實(shí)驗(yàn)測(cè)定（癱瘓率實(shí)驗(yàn)）每組30條線蟲，每2小時(shí)進(jìn)行觀察線蟲癱瘓及死亡數(shù)量，根據(jù)線蟲非癱瘓數(shù)量繪制圖表，進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。選取模型組與中劑量組線蟲，每組100條，將同期化的線蟲在16℃培養(yǎng)48h后轉(zhuǎn)移至25℃進(jìn)行誘導(dǎo)，誘導(dǎo)48h后，分別提取線蟲體內(nèi)的總mRNA，之后進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，最后

3、進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR來檢測(cè)TNFAIP1homolog(F22E5.6、ZC239.12)，HSP16.2(Y46H3A.D)，HSP16.41(Y46H3A.E)基因表達(dá)量的變化。
　　結(jié)果:1.其中壽命實(shí)驗(yàn)中，各劑量藥物組較模型組平均壽命分別延長(zhǎng)30.8％，22.05％，64.70％，平均延長(zhǎng)39.22％。
　　2.平均壽命延長(zhǎng)，但線蟲存活率并不隨著藥物濃度升高而升高。
　　3.壽命實(shí)驗(yàn)中藥物組比模型組數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)

4、果，P值小于0.05，實(shí)驗(yàn)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，且中劑量組(50mg/L)比模型組數(shù)據(jù)P值小于0.01。
　　4.Aβ引起神經(jīng)損傷實(shí)驗(yàn)測(cè)定（癱瘓率實(shí)驗(yàn)），各劑量藥物組與模型組比較，P值小于0.05，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　5.低劑量藥物組(25mg/L)線蟲各段時(shí)間非癱瘓率均高于模型組線蟲非癱瘓率，其中76h時(shí)二組線蟲非癱瘓率差別最大，低劑量藥物組為63.33％，模型組為40％。
　　6.相較于模型組，中劑量組藥物增加TNFA

5、IP1homolog(F22E5.6、ZC239.12)，HSP16.2(Y46H3A.D)，HSP16.41(Y46H3A.E)等基因表達(dá)量。
　　結(jié)論:1.解毒益智方能夠延長(zhǎng)線蟲壽命的同時(shí)降低癱瘓率，且與藥物濃度不存在相關(guān)性。
　　2.低劑量解毒益智方比中、高劑量解毒益智方對(duì)線蟲神經(jīng)損傷保護(hù)作用效果好。
　　3.解毒益智方通過提高TNFAIP1homolog(F22E5.6、ZC239.12)，HSP16.2(Y4