ABO聯(lián)合D609抑制臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞老化的研究.pdf

1、目的:
　　間充質(zhì)干細(xì)胞是20世紀(jì)末發(fā)現(xiàn)的一種成體干細(xì)胞，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)該種細(xì)胞可由多種成體組織中獲得。因其具有多向分化潛能及免疫調(diào)控等功能，該細(xì)胞具有較廣闊的臨床應(yīng)用前景?，F(xiàn)在，臨床研究的間充質(zhì)干細(xì)胞以臍帶來源最為常見。自2015年《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則》下發(fā)以來，臨床研究的間充質(zhì)干細(xì)胞多采用無血清培養(yǎng)體系進(jìn)行體外培養(yǎng)。但與之相伴隨的問題則是細(xì)胞增殖能力偏弱且容易老化。鑒于本實驗室以前的研究成果，本文著重研究小分子

2、化合物ABO聯(lián)合D609在無血清體系中對臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的老化是否有抑制作用，并探討聯(lián)合作用下臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的應(yīng)用優(yōu)勢。
　　內(nèi)容:
　　1.從臍帶組織中分離獲得間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)，并對細(xì)胞相關(guān)基礎(chǔ)指標(biāo)進(jìn)行鑒定。
　　2.確定ABO及D609的使用濃度，并驗證這兩種化合物的使用對臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞老化的影響。
　　3.研究ABO及D609的使用對臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞長時間運輸抗凋亡能力的影響。
　　4.檢

3、測ABO及D609的使用對臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞核型和細(xì)胞表型的影響。
　　方法:
　　1.使用組織塊貼壁培養(yǎng)的方法獲得臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)，并按照常規(guī)方法進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。取第三代細(xì)胞進(jìn)行HE染色觀察細(xì)胞形態(tài)并進(jìn)行體外誘導(dǎo)分化等基本檢測。
　　2.用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表型。
　　3.將培養(yǎng)的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分為實驗組和對照組，取第八代細(xì)胞，實驗組額外添加ABO及D609，檢測細(xì)胞增殖情況，并利用半乳糖苷酶染色方法

4、檢測細(xì)胞老化情況，流式方法檢測細(xì)胞長時間運輸后的凋亡水平。
　　4.驗證ABO和D609聯(lián)合培養(yǎng)是否會對間充質(zhì)干細(xì)胞的核型和細(xì)胞表型產(chǎn)生影響。
　　結(jié)果:
　　1.使用組織塊貼壁法可以從臍帶中分離得到間充質(zhì)干細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)為紡錘狀且貼附于培養(yǎng)瓶壁生長。
　　2.間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物CD34、CD45、HLA-DR陰性表達(dá)（低于2％），CD44、CD73、CD90、CD105高表達(dá)（高于95％），符合間充質(zhì)干細(xì)胞

5、細(xì)胞表型特征;間充質(zhì)干細(xì)胞在體外誘導(dǎo)培養(yǎng)條件下可向成骨方向、成指方向及成軟骨方向分化。
　　3.與對照組相比，實驗組（添加ABO及D609組）的細(xì)胞增殖活性更強(qiáng)，且活性減退速度慢,經(jīng)保存放置后細(xì)胞凋亡比率水平更低;同時對第8代細(xì)胞進(jìn)行半乳糖苷酶染色檢測后發(fā)現(xiàn)，實驗組比對照組細(xì)胞老化比率低;
　　4.從原代培養(yǎng)開始添加ABO及D609培養(yǎng)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞至第八代后細(xì)胞表型及核型檢測均正常。
　　結(jié)論:
　　1.通過