榮胃理氣方聯(lián)合守宮對慢性萎縮性胃炎模型大鼠胃黏膜修復(fù)作用及Wnt信號通路的影響.pdf

1、研究目的：
　　通過建立慢性萎縮性胃炎(chronic atrophic gastritis，CAG)大鼠模型，從形態(tài)學(xué)（HE染色，CD34染色切片）、抗氧化損傷（SOD、MDA）、細(xì)胞增殖與凋亡（P53，PCNA）、信號通路（Wnt通路）多方面進(jìn)行研究，觀察榮胃理氣方聯(lián)合守宮對CAG模型大鼠胃粘膜的修復(fù)作用和機制。
　　研究方法：
　　選用72只健康純種SPF級SD雄性大鼠，將其飼養(yǎng)在SPF環(huán)境中。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，

2、給予去氧膽酸鈉溶液自由飲用聯(lián)合酒精灌服及饑飽失常喂養(yǎng)法刺激大鼠誘發(fā)CAG模型。將造模成功的大鼠進(jìn)行隨機分組，分別為空白對照組（K）、模型組（M)、中藥治療組（Z）、胃復(fù)春組（W）、葉酸組（Y），每組10只。造模成功后于第三天開始灌胃給藥，藥物干預(yù)28天后進(jìn)行采血以及取材。應(yīng)用 HE染色法觀察各組大鼠胃粘膜的病理變化，應(yīng)用CD34免疫組化染色法檢測大鼠胃粘膜的微血管數(shù)量及微血管密度；使用ELISA法檢測大鼠血清中胃泌素（GAS）、超氧化物

3、歧化酶（SOD）/丙二醛（MDA），血清生長抑素（SS）/血清前列腺素E2（PGE2）的含量；應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測各組大鼠胃粘膜中P53以及PCNA的基因表達(dá)水平；同時應(yīng)用免疫組化法檢測大鼠胃粘膜中β-catenin、GSK-3β、cyclinD1以及 COX-2蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.對CAG模型大鼠組織形態(tài)的影響通過HE染色，結(jié)果顯示，模型組大鼠的胃粘膜出現(xiàn)了充血、水腫以及腺管排列紊亂等表現(xiàn)，并且黏液層脫

4、落增多，胃小凹可見變淺，而粘膜固有層變薄并且出現(xiàn)了萎縮，腺體腔變小以及數(shù)目減少，伴有囊性擴(kuò)張，粘膜下層水腫明顯，炎性細(xì)胞散在分布，固有層內(nèi)出現(xiàn)淋巴細(xì)胞浸潤等病變。中藥治療組中的各大鼠胃粘膜罕見糜爛和缺損，并未出現(xiàn)胃潰瘍病灶，且粘膜層的厚度大致都是正常的，腺體排列也是基本整齊的，數(shù)量并未見明顯減少，亦無腸上皮化生以及不典型增生等病變。胃復(fù)春組的大鼠胃粘膜有少許的糜爛和缺損，偶可見有潰瘍病灶，粘膜層稍有增厚，腺體排列略顯紊亂，數(shù)量減少大致約

5、二分之一左右,偶可見腸上皮化生以及不典型增生等改變。葉酸片組中的大鼠胃點膜少見糜爛、缺損，偶有潰瘍的病灶，粘膜變厚，腺體排列略顯紊亂，數(shù)量減少大致有1/2左右，偶有腸上皮化生等形態(tài)變化。通過CD34染色，然后檢測大鼠胃粘膜微血管數(shù)量（MVC）以及微血管密度（MVD），結(jié)果顯示，與空白對照組比較，模型組大鼠MVD值明顯降低（P＜0.01）；與模型組比較，中藥治療組數(shù)值明顯升高(P＜0.01)；免疫組化染色顯示空白組胃黏膜有不同程度的充血反

6、應(yīng)，模型組可見胃黏膜上皮及固有腺體細(xì)胞增生，黏膜固有層和黏膜下層間質(zhì)有血管數(shù)量減少。經(jīng)中藥方治療后胃黏膜微血管密度增多，接近正常，中藥治療組與胃復(fù)春組及葉酸組比較亦有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05)。
　　2.對慢性萎縮性胃炎大鼠血清GAS、SS、PGE2、SOD、MDA的影響與空白對照組比較，模型組大鼠胃泌素（GAS）水平明顯降低(P＜0.01)；與模型組比較，中藥治療組血清胃泌素（GAS）水平均明顯升高(P＜0.01)；與胃復(fù)春組比

7、較，中藥治療組血清胃泌素（GAS）水平升高具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；中藥治療組與葉酸組比較，血清胃泌素（GAS）水平無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05)。
　　與空白對照組比較，模型組大鼠血清生長抑素（SS）和前列腺素（PGE2）水平顯著降低(P＜0.01)；與模型組比較，中藥治療組大鼠血清生長抑素（SS）和前列腺素（PGE2）水平顯著升高 P＜0.01)，與葉酸組、胃復(fù)春組比較，血清生長抑素（SS）和前列腺素（PGE2）變化上無統(tǒng)

8、計學(xué)差異（P＞0.05）。
　　與空白對照組比較，模型組大鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）活力降低，丙二醛（MDA）數(shù)值升高(P＜0.05)；與模型組比較，中藥治療組SOD活力明顯升高，MDA水平明顯降低(P＜0.01)，與胃復(fù)春組、葉酸組比較，中藥治療組在SOD、MDA變化上無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　3.對慢性萎縮性胃炎大鼠胃黏膜P53、PCNA基因表達(dá)的影響與空白對照組相比，模型組大鼠胃黏膜組織P53水平明顯高于正常組(P＜0.

9、01)，胃黏膜組織病變明顯。不同治療組的P53指數(shù)明顯降低，胃黏膜病理組織學(xué)改變明顯。中藥治療組與模型組比較差異顯著(P＜0.01);中藥治療組與胃復(fù)春組比較差異顯著(P＜0.01)，中藥治療組與葉酸組比較無明顯差異（P＞0.05）。
　　與空白對照組相比，模型組大鼠胃黏膜組織PCNA水平明顯高于正常組(P＜0.01)，胃黏膜組織病變明顯。不同治療組的PCNA指數(shù)明顯降低，胃黏膜病理組織學(xué)改變明顯。中藥治療組與模型組比較差異顯著(

10、P＜0.01);中藥治療組與胃復(fù)春組、葉酸組比較差異顯著(P＜0.01)。
　　4.對慢性萎縮性胃炎大鼠胃黏膜 Wnt信號通路的影響與空白組相比，模型組GSK-3β的表達(dá)顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01)。中藥治療組、葉酸組、胃復(fù)春組GSK-3β的表達(dá)均升高，中藥治療組GSK-3β蛋白的表達(dá)情況要明顯優(yōu)于胃復(fù)春組和葉酸組（P＜0.01)。
　　與空白組相比，模型組β-catenin的表達(dá)顯著升高，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義

11、（P＜0.01)。中藥治療組、葉酸組、胃復(fù)春組GSK-3β的表達(dá)均降低，中藥治療組β-catenin蛋白的表達(dá)情況要明顯優(yōu)于胃復(fù)春組和葉酸組（P＜0.05)。
　　與空白對照組相比較，模型組cyclinD1的表達(dá)增強，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01)。中藥治療組、葉酸組、胃復(fù)春組GSK-3β的表達(dá)均降低，與模型對照組相比差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05)。中藥治療組療效明顯優(yōu)于胃復(fù)春組和葉酸組（P＜0.01)。
　　與

12、空白對照組相比較，模型組COX-2的表達(dá)增強，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01)。中藥治療組、葉酸組、胃復(fù)春組GSK-3β的表達(dá)均明顯降低，與模型對照組相比差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01)。中藥治療組療效明顯優(yōu)于胃復(fù)春組和葉酸組（P＜0.01)。
　　結(jié)論：
　　榮胃理氣方聯(lián)合守宮可以明顯改善胃黏膜萎縮狀態(tài)，增加胃黏膜區(qū)新生血管數(shù)目，對胃黏膜具有促血管新生作用，其效果優(yōu)于胃復(fù)春和葉酸。
　　榮胃理氣方聯(lián)合守宮可增

13、加胃泌素，生長抑素及前列腺素E2的水平，降低丙二醛含量，抑制炎癥反應(yīng)，修復(fù)受損的胃黏膜，并能增加SOD活力。其對胃黏膜的修復(fù)作用可能與增加胃泌素、生長抑素、前列腺素E2水平、提升SOD活力，降低MDA含量有關(guān)。
　　榮胃理氣方聯(lián)合守宮抑制胃黏膜P53、PCNA基因的過度表達(dá)，從而防止慢性萎縮性胃炎向胃癌轉(zhuǎn)化，說明榮胃理氣方聯(lián)合守宮具有一定的優(yōu)勢，且其對胃黏膜修復(fù)作用可能與抑制P53、PCNA基因的過度表達(dá)有關(guān)。
　　榮胃理氣

14、方聯(lián)合守宮能明顯提高胃黏膜 GSK-3β、cyclinD1以及COX-2的表達(dá)，降低胃黏膜β-catenin的表達(dá)，其對胃黏膜修復(fù)的作用機制可能在于提高胃黏膜中相關(guān)生長因子，激活Wnt通路進(jìn)而逆轉(zhuǎn)胃黏膜萎縮，達(dá)到修復(fù)胃黏膜的作用。
　　榮胃理氣方聯(lián)合守宮具有較好的胃黏膜修復(fù)作用，效果優(yōu)于胃復(fù)春和葉酸。其能有效地抑制胃黏膜的氧化應(yīng)激反應(yīng)，提高胃黏膜的修復(fù)能力，發(fā)揮中醫(yī)藥整體調(diào)節(jié)、多靶點的作用特點，為榮胃理氣方聯(lián)合守宮臨床治療慢性萎縮