金水清對系膜增生性腎炎濕熱證血尿大鼠NF-κB、TGF-β1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　觀察金水清對MsPGN濕熱證血尿大鼠血清、腎臟組織中TGF-β1、NF-κB表達(dá)水平的影響，探討金水清防治此模型的作用機(jī)制，同時(shí)擬部分動(dòng)態(tài)觀察大鼠尿液、生化、病理及炎性因子變化及其關(guān)系，初步探索此模型的發(fā)生發(fā)展規(guī)律，為臨床治療血尿提供依據(jù)。
　　方法：
　　將75只SPF級別健康雄性SD大鼠（3周齡）隨機(jī)分為5組即正常組、模型組（模一組、模二組）、治療組（金早組、金晚組），每組15只。模一組在口服、尾靜脈注

2、射牛血清白蛋白（BSA）和尾靜脈注射葡萄球菌腸毒素 B（SEB）的基礎(chǔ)上，復(fù)加濕熱環(huán)境和高糖高脂飲食，制備 MsPGN濕熱證血尿大鼠模型。模二組、金早組和金晚組均在模一組的基礎(chǔ)上將尾靜脈注射SEB改為皮下注射四氯化碳（CCL4）和尾靜脈注射脂多糖（LPS）。金早組、金晚組分別于造模第7周、9周開始灌服金水清，每日一次，至12周末。正常組每日給予等量酸化水灌服，至12周末。觀察各組大鼠的一般情況。每周收集尿液，并在實(shí)驗(yàn)單數(shù)周測定尿紅細(xì)胞個(gè)

3、數(shù)，雙數(shù)周測定24小時(shí)尿蛋白定量。實(shí)驗(yàn)第8、10、12周末處死大鼠，每組各5只，并檢測血生化，光學(xué)顯微鏡下觀察各組大鼠腎組織病理變化，酶聯(lián)免疫吸附測定法、免疫組化法分別檢測血清、腎組織中TGF-β1、NF-κB的含量。結(jié)果：
　　1.一般情況：正常組大鼠在實(shí)驗(yàn)過程中精神狀態(tài)、活動(dòng)、反應(yīng)性、體重等均無明顯異常;模型組和治療組大鼠造模期間均出現(xiàn)倦怠嗜臥、毛發(fā)脫落、進(jìn)食減少、體重減輕、小便短赤、大便稀爛、舌質(zhì)暗紅，但程度各不相等，甚則部

4、分出現(xiàn)皮下水腫、肛門紅腫等濕熱癥狀；模一、二組濕熱癥狀無明顯差異；各治療組大鼠上述濕熱癥狀均有不同程度的改善，以金早組改善濕熱癥狀最為顯著。
　　2.尿紅細(xì)胞、尿蛋白測定：正常組大鼠在實(shí)驗(yàn)期間無或出現(xiàn)極少量血尿、蛋白尿；各模型組大鼠于造模6周、8周后均出現(xiàn)程度不等的血尿、蛋白尿，其中各模型組第8周可見血尿和少量蛋白尿（24Hupro＞10mg），第10周可見血尿和大量蛋白尿（24Hupro＞50mg），與正常組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

5、＜0.05）；模一組與模二組血尿比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）、蛋白尿比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；各治療組血尿、蛋白尿逐漸減少，與模二組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），第12周金早組與模二組比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）、金早組與金晚組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.腎功能檢測：造模期間各模型組、治療組尿素氮、肌酐均較正常組升高，比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　4.血脂檢測：各模型組血清總

6、膽固醇（CHOL）、甘油三酯（TG）顯著升高，與正常組比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；模一組與模二組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；各治療組CHOL、TG的含量降低，第12周金早組與模二組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）、金晚組與模二組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　5.酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA法）檢測：模型組血清TGF-β1、NF-κB表達(dá)水平明顯升高，與正常組比較，前者實(shí)驗(yàn)第8周無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05

7、）、后者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），實(shí)驗(yàn)第10周、12周比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；模二組與模一組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；各治療組TGF-β1、NF-κB表達(dá)水平降低，第12周金早組與模二組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）、金晚組與模二組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；第12周金早組與金晚組血清 NF-κB比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）、TGF-β1比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　6.免疫組化法

8、檢測：正常組大鼠腎小球、腎小管中無或偶有輕微TGF-β1、NF-κB棕色陽性表達(dá)；各模型組大鼠腎臟組織中 TGF-β1、NF-κB有較強(qiáng)的表達(dá)，棕色陽性主要分布于系膜區(qū)、腎小管上皮細(xì)胞等部位；各治療組大鼠亦均有陽性表達(dá)，部位同模型組，但程度均有所減輕。Image圖象分析檢測其OD值顯示:各模型組與正常組比較OD值升高，實(shí)驗(yàn)第8 周TGF-β1 OD值無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）、NF-κB OD值有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）,

9、第10周、12周兩者均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；模一組與模二組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；各治療組與模二組比較OD值均降低，第12周金早組與模二組兩者比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），金晚組與模二組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），金早組與金晚組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　7.光鏡下可見：正常組腎臟組織無系膜細(xì)胞增生、細(xì)胞外基質(zhì)聚集，毛細(xì)血管襻開放良好，腎小球形態(tài)正常，腎小管結(jié)構(gòu)規(guī)則，腎間質(zhì)無炎癥細(xì)胞浸潤；

10、各模型組均出現(xiàn)系膜細(xì)胞、系膜基質(zhì)明顯增生，彌漫性腎小球系膜區(qū)增寬呈分葉狀，部分腎小球可見萎縮，毛細(xì)血管管腔非常狹窄甚則閉塞，腎間質(zhì)有大量炎性細(xì)胞浸潤，腎小管上皮細(xì)胞腫脹變性甚則脫落，腎小管管腔亦有閉塞，且在實(shí)驗(yàn)第8周、10周、12周逐漸加重，模一組與模二組比較未見顯著差異；金早組腎小球系膜細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)輕度增生，腎小球無萎縮，毛細(xì)血管管腔輕度狹窄，腎小管上皮細(xì)胞偶變性腫脹，間質(zhì)輕度炎性細(xì)胞浸潤，在實(shí)驗(yàn)12周改善明顯；金晚組腎小球系膜細(xì)

11、胞、細(xì)胞外基質(zhì)輕中度增生，腎小球偶見萎縮，毛細(xì)血管管腔輕中度狹窄，腎小管上皮細(xì)胞變性腫脹，腎小管管腔偶見閉塞，間質(zhì)輕中度炎性細(xì)胞浸潤，實(shí)驗(yàn)第12周改善無金早組明顯。
　　結(jié)論：
　　根據(jù)中醫(yī)濕熱證的病因病理學(xué)理論，采用綜合因素，成功地建立更經(jīng)濟(jì)、更實(shí)用的系膜增生性腎炎濕熱證血尿大鼠模型；金水清可明顯改善系膜增生性腎炎濕熱證血尿大鼠的濕熱癥狀，并通過下調(diào)早期炎癥標(biāo)志性因子NF-κB、腎臟纖維化因子TGFβ1的表達(dá)，從而減少腎臟