兩棲類抗菌肽Temporin-1CEa及其改造肽對新生血管生成和黑色素瘤轉(zhuǎn)移侵襲影響的研究.pdf

1、分類號：密級：學(xué)校代碼：10165學(xué)號：201211000930遣掌師耗大學(xué)碩士學(xué)位論文兩棲類抗菌肽Temporin1OEa及其改造肽對新生血管生成和黑色素瘤轉(zhuǎn)移侵襲影響的研究作者姓名：學(xué)科、專業(yè)：研究方向：導(dǎo)師姓名：張亮有機化學(xué)多肽生物化學(xué)王澈副教授尚德靜教授2015年05月遼寧師范大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要黑色素瘤(melanoma)是一種高度惡化并具有快速轉(zhuǎn)移和高度侵襲特性的腫瘤，該瘤進展迅速，預(yù)后極差，并對一般的化療藥物具有耐受性，因

2、此缺乏有效的治療藥物。近年來，具有抗癌活性的陽離子抗菌肽由于其獨特的作用機制，逐漸受到人們的廣泛關(guān)注。我們前期的研究工作發(fā)現(xiàn)，來自于中國林蛙皮膚分泌物的陽離子抗菌肽TemporinlCEa具有較好的選擇性抗癌活性。在本論文中，我們將對Temporin1CEa及其六個改造肽的黑色素瘤選擇性殺傷作用進行考察，并進一步對其抗腫瘤血管新生和抑制腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲的活性進行了初步的評價。我們首先利用MTT法考察了Temporin1CEa及其改造肽對人

3、黑色素瘤A375細胞和人永生化表皮Hacat細胞的細胞毒作用。實驗結(jié)果表明，Temporin1CEa及其改造肽對A375細胞具有不同程度的殺傷作用，其作用強度依次為LK2(6)AN(2L)LK2(6)A(L)Temporin1CEaLKlLK3LK2(6)LK2(5)，其中Temporin1CEa、LKl和LK2(6)A(L)對腫瘤細胞具有較好的選擇性。此外，通過AnnexinVFITC單染，采用流式細胞儀對A375細胞和Hacat細胞

4、表面的負電荷成分磷脂酰絲氨酸(PhosphatidyIserine，PS)含量進行了檢測，結(jié)果顯示A375細胞表面PS含量明顯高于Hacat細胞，這可能是Temporin1CEa及其改造肽選擇性殺傷A375細胞的機制之一。同時，我們的實驗結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，加入NaCl03抑制細胞表面硫酸基團的表達后，能夠明顯增強Temporin1CEa、LKl和LK2(6)A(L)的抗腫瘤活性，顯示細胞表面硫酸基團能夠減弱抗菌肽與腫瘤細胞之間的相互作用。在明

5、確了Temporin1CEa及其改造肽對人黑色素瘤A375細胞的選擇性殺傷作用之后，我們又進一步對其抗黑色素瘤轉(zhuǎn)移和侵襲的活性進行了考察。Transwell遷移／侵襲實驗結(jié)果顯示，Temporin1CEa及其改造肽LKl和LK2(6)A(L)對A375細胞的遷移／侵襲具有明顯的抑制作用，其作用強弱順序為Temporin1CEaLK2(6)A(L)LKl。此外，采用ELISA方法檢測人基質(zhì)金屬蛋白酶2(Matrixmetalloprote

6、inase2，MMP2)和人血管內(nèi)皮生長因子(VascularEndothelialGrowthFactor，V】三GF)表達，實驗結(jié)果顯示，Temporin01CEa、LKl和LK2(6)A(L)能夠抑制A375細胞MMP2和VEGF的釋放，且抑制效果呈劑量依賴方式，提示Temporin1CEa及其改造肽的腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲抑制活性可能與降低黑色素瘤細胞MMP2和VEGF的表達和釋放有關(guān)。由于腫瘤的遷移和侵襲與血管新生密切相關(guān)，因此，我們