臺灣蟲草單次生子囊孢子菌株交配型基因的初步研究.pdf

1、臺灣蟲草(OphiocordycepsformosanaKobayasi&Shimizu)其無性型為黃山被毛孢(Hirsutellahuangshanensis)。本文首次對臺灣蟲草無性型菌株的交配型基因進行了較為系統(tǒng)地研究,主要內(nèi)容包括:采用稀釋涂布平板法和顯微定位法獲得臺灣蟲草的單次生子囊孢子,并對次生子囊孢子的萌發(fā)與生長過程進行觀察記錄;利用譚琦等人設(shè)計的引物對分離所得到的34株單次生子囊孢子菌株的交配型基因進行PCR擴增,測序,

2、再對測序結(jié)果進行比對和分析,建立系統(tǒng)發(fā)育樹進行遺傳多樣性分析和聚類分析;對含有不同交配型基因的單次生子囊孢子菌株分別進行PPDA平板培養(yǎng),SDY液體培養(yǎng)和蟲草專用培養(yǎng)基子實體誘導(dǎo)培養(yǎng),以探究不同交配型類型菌株生長狀態(tài)的差異,并且希望能分析出臺灣蟲草的交配型類型。
　　臺灣蟲草次生子囊孢子分離試驗結(jié)果表明:在25℃培養(yǎng)3~7天后,大部分次生子囊孢子開始萌發(fā),一端膨大伸長,另一端稍微萎縮,長度約7~12μm。之后一端繼續(xù)緩慢伸長,14

3、天左右孢子長度大約為72.36~162.59μm。40天左右肉眼可見微菌落,呈灰白色,產(chǎn)生分生孢子,2~6個聚集成團,外被粘液層,分生孢子單孢、無色、光滑、柱狀,大小約為7×2.5μm。微觀形態(tài)鑒定表明為典型的黃山被毛孢。
　　臺灣蟲草單次生子囊孢子菌株交配型基因研究結(jié)果表明:34株單次生子囊孢子菌株中14個菌株只含有MAT1-1基因;4個菌株只含有MAT1-2基因;剩下的16個菌株兩種基因都具有。將測序結(jié)果在GenBank上比對

4、發(fā)現(xiàn)供試菌株的MAT1-1基因與蛹蟲草的MAT1-1-1基因較為相似;供試菌株的MAT1-2基因與蛹蟲草的MAT1-2-1基因較為相似。此外,黃山被毛孢的交配型基因MAT1-1,對于不同的單孢菌株有一定的區(qū)分度;而不同單孢菌株的MAT1-2基因卻高度相似,無法反映出遺傳多樣性。這兩種交配型基因均可以用作建立系統(tǒng)發(fā)育樹,并且能很明顯地將實驗菌株與GenBank中親緣關(guān)系近的菌株聚集在一起。
　　不同交配型基因菌株生長狀態(tài)差異試驗結(jié)果