腭裂術(shù)后腭部粘膜瘢痕組織中肥大細(xì)胞的研究.pdf

1、目的：
　　通過日本大耳白兔腭部造裂同時(shí)進(jìn)行腭裂修復(fù)術(shù)，造裂的兔為實(shí)驗(yàn)組，未進(jìn)行造裂的為對(duì)照組；三個(gè)月后，采取靜脈注射空氣法處死，切取腭部造裂處的瘢痕組織，與對(duì)照組對(duì)應(yīng)部位的正常粘膜組織，病理切片制作，光鏡下觀察對(duì)比研究，觀察腭裂修復(fù)術(shù)后瘢痕組織與正常粘膜組織中肥大細(xì)胞的數(shù)量、形態(tài)、分布、及其與肥大細(xì)胞相關(guān)活性物質(zhì)的變化。
　　研究分兩部分進(jìn)行
　　第一部分組織化學(xué)染色
　　材料與方法：
　　選7周齡，日本

2、大耳白兔12只為研究標(biāo)本，飼養(yǎng)7天后，隨機(jī)抽取6只全麻下進(jìn)行腭部造裂，同時(shí)進(jìn)行腭裂修復(fù)手術(shù)；待腭部粘膜瘢痕形成，采取靜脈注射空氣法栓塞處死，取實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組相部位腭部粘膜1.0cm×0.5cm×0.5cm，4％中性福爾馬林液固定。24小時(shí)后，石蠟包埋。石蠟組織切片4～5微米，常規(guī)脫蠟至水。用俾士麥棕、碘綠、馬汀氏黃進(jìn)行組合染色。光鏡觀察并照相。
　　結(jié)果：
　　1.肉眼觀察實(shí)驗(yàn)組腭部粘膜瘢痕組織與周圍正常粘膜組織界限明顯，瘢

3、痕區(qū)域腭皺襞消失，顏色較白，長(zhǎng)約1.0cm，寬約0.5cm；質(zhì)地較韌；正常粘膜顏色粉紅，較軟，腭皺襞明顯。剖面實(shí)驗(yàn)組粘膜為灰白色或淺粉紅色；對(duì)照組粘膜顏色粉紅。
　　2.實(shí)驗(yàn)組肥大細(xì)胞體積較大，形態(tài)不規(guī)則；
　　3.實(shí)驗(yàn)組各細(xì)胞分層不明顯，部分肥大細(xì)胞正在脫顆粒；部分肥大細(xì)胞內(nèi)尚有顆粒殘存。對(duì)照組肥大細(xì)胞主要分布在固有層，多位于結(jié)締組織的深層、血管、分泌管的周圍，數(shù)量較少，輪廓清楚，未發(fā)現(xiàn)脫顆?，F(xiàn)象，胞漿內(nèi)顆粒較少。

4、　　第二部分免疫組化染色
　　材料：同實(shí)驗(yàn)一
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組進(jìn)行BB-IG-MY組合染色的下一張連續(xù)切片，進(jìn)行P物質(zhì)和VIP血管活性肽免疫組化染色，組織標(biāo)本貼于多聚賴氨酸處理的載玻片上，烤片過夜。二甲苯、無水酒精、95％酒精分別浸泡，PBS緩沖液浸泡沖洗。擦干切片，溫育，PBS緩沖液浸泡沖洗。擦干切片，正常山羊血清工作液封閉，室溫孵育，分別滴加稀釋的兔抗人P物質(zhì)抗體與VIP多克隆抗體，4℃過夜。滴加生物

5、素標(biāo)記的二抗工作液，辣根酶標(biāo)記卵白素工作液，溫育。PBS緩沖液浸泡沖洗，DAB顯色。蘇木素浸泡，分化液分化，返藍(lán)。中性樹膠封片。光鏡觀察并照相。
　　結(jié)果：
　　1.P物質(zhì)反應(yīng)物存在于肥大細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，呈顆粒狀、褐色，胞核為陰性。
　　2.對(duì)照組褐色顆粒較少見，顆粒集中；實(shí)驗(yàn)組褐色顆粒較多；且顆粒散在不集中。
　　結(jié)論：
　　1.兩種染色方法均發(fā)現(xiàn)粘膜斑痕組織中肥大細(xì)胞數(shù)量均較正常粘膜中多。
　　2.