nod／scid孕鼠淋巴細(xì)胞表型檢測和nk細(xì)胞活性分析

1、中華微 生物學(xué) 和免疫學(xué)雜志 2 0 0 5 年 l O 月第 2 5 卷第 l O 期 C h i nJM i c r o b i o ll m n m n o l ， O c t o b e r 2 0 O 5 ， V o l2 5 ， N o ． 1 0N O D ／ S C I D孕 鼠淋 巴細(xì)胞 表 型 檢測 和 N K細(xì)胞 活 性 分 析 林羿王通 狄靜芳曾山黃錦桃 馮錚 曾耀英 ． 基 礎(chǔ) 免 疫 學(xué) ．【 摘要 】目的

2、觀察 N O D ／ S C I D小鼠免疫狀況和生育力特征， 并分析 N K細(xì)胞亞群對(duì) 同基因交 配組合 N O D ／ S C I D× N O D ／ S C I D妊娠結(jié) 局的影 響。 方 法 采用 流式 細(xì)胞術(shù) 對(duì)未 孕和 孕 1 3 ． 5d 的 N O D ／S C I D 小 鼠進(jìn)行淋 巴細(xì)胞表型分析 ， 并系統(tǒng)地觀察和 比較 N O D ／ S C I D× N O D ／ S C I D和 B A

3、 L B ／ c ×B A L B ／ c 小 鼠的生育力 特征。分別 采用 多聚 次黃苷 酸． 胞苷 酸 ( p o l y i n o s i n i c ． p o l y c y t i d y l i ca c i d ， p o l yI ： C ) 或抗 a s i a l oG M 1 單抗 ( a n t i — a s i a l oG M 1 ) 刺 激或抑 制 N K 細(xì) 胞活性 ， 并分 別觀 察這

4、些 因素對(duì) 妊 娠結(jié)局 的影 響。 結(jié)果 與對(duì)照組 N O D ／ S C I D 小 鼠相 比， p o l yI ： C 處理組 N O D ／ S C I D ×N O D ／ S C I D 小 鼠平 均每窩產(chǎn)仔數(shù) 增多 ， 而注 射抗 a s i a l oG M 1 單抗則使胚胎吸收率增高 ， 進(jìn) 而平均 每窩產(chǎn)仔數(shù)顯 著減少 。 結(jié)論 在 N O D ／ S C I D小 鼠孕期母． 胎界面保持適當(dāng)水平的 N K

5、細(xì)胞活性對(duì)妊娠結(jié)局有利?！?關(guān)鍵詞 】 流產(chǎn)； 動(dòng)物模型； 細(xì)胞表面標(biāo)志物； 免疫耐受 仰 咖_ ) t y p i 】 【 l ga n dN K c e l la c t i v i t ya n a l ~i si np r e g n a n tN O D ／ S C I I )mi c e刪 ， W A N GT o n g，D l ~ n g - f a n g，Z E N GS h a h ，H U A N G~

6、n - t a o ，F(xiàn) E N GZ h e n g， Z E N GY a o - y i n g．I n s t i t u t ec I jl ~ s u eT r a n s 一珊 l 缸 砌na n dI m m u n o l o g y，J i - r t a l tU m v e r s ~ v ，l nu5 1 0 6 3 2 ，C h i n aC o r r e s p o n d ／ n ga ／ ／ l ~r

7、 ：倒 l GY a o - y ／ n g 。E m a ／ ／ ：t z e n g y y @j n a． e d u ． 饑 【A b s t r a c t 】 O b j e c t i v eT oi d e n t i f ya n dq u a n t i f yt h ei m m u n i t ya n df e a i l i t yf e a t u r e so fN O D ／ S C I Dm i c

8、ea n dt oe v a l u a t et h ee f e c t so fN K c e l ls u b s e t so nt h ep r e g n a n c yo u t c o me so fs y n g e n e i cN OD ／ S C I D × NO D， S C I Dma t i n gc o mb i n a t i o n．M e t h o d sL y mp h o c y

9、 t ep h e n o t y p i n gw a sp e r f o r me dw i t hf l o wc ~o me t r y ． F e r t i l i t yf e a t u r e sw e r ea s s e s s e di nN 0D ， S CI D ×N OD ／ S C I Dm i c e ．NKc e l l sw e r es t i mu l a t e dw i t h1

10、 3 o l yI ： C ( p o l y i n o s i n i c — p o l y c y t l d y l i ca c i d ) ．o ri n h i b i t e d w i t ha n t i ． a s i a l oG M1a n t i s e r u m。r e s p e ct i v e l y ．1 1 1 ee f e c t so ft h e s ef a c t o r so n

11、p r e g n a n c yo u t ．哪 n e sw e r ee v a l u a t e d r e s p e c t i v e l y．Re s u l t sAs l i g h Ⅱ vl a r g e rs i z eo f l i t t e rw a so b s e r v e d i np o l yI ： C - t r e a t e dN 0D ／S C I D× N 0 D

12、， S C I Dmi c et h a nt h a ti nc o n t r o lN 0 D／ S C I Dmi c e ．O nt heo t he rh a n d ．t her e s o r p t i o nr a t eo fe mb r y o sw 8 sb o o s t e d a f t e ra n t i - a s i a l oG M1i n j e ct i o n 。s u b s e q

13、u e n t l yc o r r e l a t e dw i t hal o w e rn u m b e ro fI m p sb o m p e rl i t t e r ．C( 1 i d~ o nA c e r t a i nl e v e lo fr e mn a n tN Kc e l la c t i v i t yi nN 0 D／ S C I Dmi c ema yb e n e f i tt hef e t

14、 o - ma t e ma l t o l e r ．a(chǎn) n c ed u r i n gp r e g n a n c y ．【Ke yw o r d s】A b o r t i o n ； A n i m a lm o d e l ； C e us u r f a c em a r k e r ；I l n l n i H l et o l e r a n c e1 9 8 3 年 B o s m a 等 首先報(bào)道 ， 具有重度

15、聯(lián)合免 疫缺陷( s e v e r ec o m b i n e di m m t m o d e f i c i e n c y ， S OD ) 基因 同源突變 ( s c i d ／ s c i d ) 的 C ． B 一 1 7小鼠， 其 T和 B淋 巴細(xì)胞均發(fā)生缺陷。雖然這些小 鼠存在細(xì)胞和體液免 疫功能缺 陷， 但是仍具 有正 常的 N K細(xì)胞功 能l 2 ] 。另一方面， N O D ／ h品系( 簡稱 N O D )

16、小 鼠具有 N K細(xì) 胞功能缺陷的特征b ] ， 并且容易發(fā)生 T細(xì)胞介導(dǎo)的 基金項(xiàng) 目： 廣東省 自然科學(xué)基金 ( 4 3 0 0 2 1 3 ) ； 國家重點(diǎn) 基礎(chǔ)研究 發(fā)展規(guī)劃項(xiàng) 目“ 9 7 3 ” 基金資 助( G 2 0 0 0 0 5 7 0 0 6 ) ； 中國博士 后科 學(xué)基金 ( 嬲 2 2 4 4 ) ； 暨南大學(xué) 引進(jìn)優(yōu)秀人才基金 ( 5 1 2 0 4 0 6 7 )作者單位 ： 5 1 0 6 3 2廣州 ，

17、 暨南大學(xué)組織 移植與 免疫研究 中心 ( 林 羿 ， 王通 ， 狄靜芳 ， 曾山， 馮錚 ， 曾耀英 ) ； 中 山大學(xué) 組織學(xué) 與胚胎學(xué) 教 研 室( 黃錦桃 )通訊 作 者 ： 曾 耀 英 ， E Ⅱ l a i l ：u e n g y y @ j n i l ． e d u ． a l ， 電 話 ： 0 2 0 -8 5 2 2 6 21 9自身免疫性 I 型糖尿病 ] 。S h u h z 等 通過繁育 ， 使 N O

18、D遺傳背景 的小 鼠獲得 s c i d ／ s c i d突變 ， 由此建立 了 N O D ／ S C I D小 鼠模型。這一模型具有 T 細(xì)胞 、 B細(xì) 胞和 N K細(xì)胞三重缺陷。雖然 N O D ／ S C I D小 鼠具有 N K細(xì)胞功能缺陷， 但是在這些動(dòng)物中仍能檢測出一 定量的、 殘存 的 N K細(xì)胞活性 J 。在一定意義上 ， 胎兒是一種特殊的半異基因( 生 理妊娠狀態(tài)下) 或完全異基因移植物( 如果卵細(xì)胞 和 精子均

19、來源于匿名供者 ) 。但移植排斥的法則在含 有外來基因的胎兒身上卻不起作用。胎兒不僅能夠 存活 ， 而且能夠健康成長。不僅如此 ， 人類和哺乳動(dòng) 物妊娠期的長度也是受到精細(xì)調(diào)控的。逐步揭示妊 娠免疫耐受現(xiàn)象的機(jī)理 ， 不僅有助于澄清原 因不明 性不孕癥 、 自發(fā)性流產(chǎn)等婦科疾病的發(fā)病機(jī)理 ， 而且 對(duì)揭示腫瘤逃避機(jī)體免疫識(shí)別和攻擊的機(jī)理 ， 以及 維普資訊 http://www.cqvip.com 中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志 2 0 0

20、5 年 l O 月第 2 5 卷第 l O 期 C h i nJM i c r o b i o ll m m u n o l ， O c t o b e r 2 0v 0 4 箜 ： !表 1B A L B ／ c ×B A U~ c 小 鼠和 用 N K細(xì)胞活化劑或抑制劑處理 的 N OD ／ S C I D×N OD ／ S C I D小鼠生育力狀況比較 Ta b l e1 ．F e r t i l i t y

21、c o mp a r t ~ b e t we e nB AL B／ c×B AU ~ca n dNOD／ S CI D ×NOD／ S CI D mi c ewi t ha n dwi t h o u tN K a c t i v a t o ro ri n h i ~t o rt r e a t m e n t* P <0． 0 5V SP B S - t r e a t e dB AL B／ c

22、15;B AL B／ ca n dNOD ／ S C I D× NOD ／ S C I Dmi c e ； 樣 P <0． 0 1V SP B S - t r e a t e dBA LB ／ c×BA LB ／ ca n dNOD／ S CI D ×NOD ／S CI D mi c e表 2 孕 1 3 ． 5d 小 鼠胚胎 吸收率和淋 巴細(xì)胞表型分析 T a b l e2 ． n e s o r

23、 p t i o nr a t eo fe mb r y o sa n dl y mp h o c y t ep h e n o t y p ~ a td a y1 3 ． 5o f 窘 E0 n：B A L B ／ c ×B A L B ／ c ( P B S )V SN O D ／ S C I D×N O D ／ S C I D ( P B S ) ；樣：N O D ／ S C I D×N O D ／

24、S C I D ( P B S )V SN O D ／ S C I D×N O D ／ S C I D ( p o l yI ： C ) ；A： N O D ／S C I D×N O D ／ S C I D( P B S )V SN O D ／ S C I D×N O D ／ S C I D ( a n t i — a s i a l oG M1 )差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而 N O D ／ S C I D小 鼠

25、胎 盤 D X 5N K細(xì) 胞百 分 率 顯 著低 于 B A I ~ ／ c 小 鼠 [ ( 1 5 ． 6±9 ． 3 ) ％ V S ( 6 1 ． 8 ±1 6 ． 1 ) ％， P= 0 ． 0 1 3 ] 。但是在孕 1 3 ． 5d 的 N O D ／ S C I D小鼠母． 胎界面仍能檢測到一些 N K細(xì)胞 [ ( 1 5 ． 6± 9 ． 3 ) ％] 。通過效應(yīng) 細(xì)胞． 靶細(xì)胞 溶解實(shí)驗(yàn)

26、 ， 可檢測 出這些 N K細(xì)胞具有一定 的活性 ( 圖 2 ) 。3 ． 注射 p o l yI ： C對(duì)妊娠 結(jié)局的影 響： 在 N O D ／S C I D小鼠孕早期注射 yI ： C可 以改善其妊娠結(jié) 局 ： 與注射 P B S 的對(duì)照組相比， p o l yI ： C處理組 N O D ／S C I D小鼠孕期母 鼠體重增長幅度和平均每窩產(chǎn)仔 數(shù)均顯著提高[ 分別 為( 1 0 1 ． 8 ± 2 7 ． 1 ) ％

27、 V S ( 7 5 ． 1 ±1 7 ． 0 ) ％ ，P<0 ． 0 5 ；( 8 ． 1±2 ． 4 )V S( 5 ． 6±1 ． 7 ) ，P< 0 ． 0 5 ， 表 1 ] 。另外 ， 多次注射 p o l yI ： C能夠使胚 胎吸收率從 1 8 ． 6 ％降低至 1 2 ． 3 ％， 但是差異水平不 具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P= 0 ． 2 3 1 ， 表 2 ) 。4 ． 注射抗

28、8 k ~ l l OG MI 對(duì)妊娠結(jié)局的影響 ： 與注 射 P B S的對(duì)照 組相 比， 注射抗 a s i a l oG M1 后 N O D ／S C I D 小 鼠孕期母 鼠體重增長幅度和平均每 窩產(chǎn)仔 數(shù)均顯著下降 [ 分別 為( 4 5 ． 7± 2 3 ． 8 ) ％ V S ( 7 5 ． 1 ±1 7 ． 0 ) ％ ，P<0 ． 0 1 ；( 2 ． 6±1 ． 9 )V S(

29、5 ． 6±1 ． 7 ) ，P<0 ． 0 1 ，表 1 ] 。另外 ， 注 射抗 a s i a l oG M 1 后 N O D ／S C I D小鼠孕 1 3 ． 5d 胚胎吸收率高達(dá) 3 9 ． 2 ％， 顯著高 于對(duì) 照組 ( 1 8 ． 6 ％ ， P=0 ． 0 3 2 ，表 2 ) 。5 ． 注射 p o l yI ： C對(duì) N K細(xì)胞活性 的影響 ： 如圖 2 所示 ， 在 p o l yI ： C的

30、刺激下 ， N O D ／ S C I D小鼠 N K細(xì) 胞活性顯著增高 。此外 ， 注射 yI ： C 使得 D X 5細(xì) 胞百分率 、 C D 9 4細(xì)胞百分 率和 D X 5C D 9 4／ D X 5細(xì)胞比率均顯 著升 高 [ 分別 為 ( 4 7 ． 4±1 7 ． 1 ) ％ V S( 1 5 ． 6 ±9 ． 3 ) ％ ，P=0 ． 0 4 7 ；( 2 4 ． 3±6 ． 2 ) ％ V

31、S( 5 ． 8±3 ． 9 ) ％，P=0 ． 0 1 2 ；( 9 3 ． 5±7 ． 3 ) ％ V S( 1 7 ． 5±3 ． 9 ) ％， P< 0 ． 0 0 1 ] ， 見表 2 和圖 1 。6 ． 注射抗 a ． ． ~l l oG M1 對(duì) N K細(xì)胞活性 的影響 ：在 N O D ／ s c I I ) 小 鼠孕早期多次注射抗 a s i a l oG M 1 抗 血清 ， 可使