pseudoalteromonassp.aj5913的κ卡拉膠酶酶學(xué)性質(zhì)及酶解產(chǎn)物分析

1、中國海洋大學(xué)博士學(xué)位論文Pseudoalteromonas sp.AJ5-913的κ-卡拉膠酶酶學(xué)性質(zhì)及酶解產(chǎn)物分析姓名：馬悅欣申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：水產(chǎn)養(yǎng)殖指導(dǎo)教師：董雙林;江曉路20080615r 卡拉膠酶。采用等電聚焦龜泳測得該酶的等電點p ，為8 ．5 。通過對該酶酶學(xué)性質(zhì)研究，確定該酶反應(yīng)的最適p H 范圍為8 ，且酶活力在p H 6 ．6 —8 ．6 范圍內(nèi)比較穩(wěn)定，最適溫度為5 5 ℃，酶活力在2 8 ℃下穩(wěn)定，但經(jīng)5

2、0 ℃一7 5 ℃處理3 0m i n ，9 5 ％的酶活力喪失，最適N a C I 濃度5 0 m m o l ／L ，金屬離子Z n 2 + ，C 0 2 + 和C u 2 +幾乎完全抑制酶的活性。動力學(xué)參數(shù)測定結(jié)果表明，^ J 5 —9 1 3 菌株的r 卡拉膠酶水解K - 卡拉膠符合米氏動力學(xué)方程，采用雙倒數(shù)法作圖法求得其米氏常數(shù)砌值為9 ．8 + 0 ．2m g ／m L 。A J 5 - 9 1 3 菌株的K - 卡拉膠酶專

3、門水解r 卡拉膠，對t 一和入一卡拉膠和瓊脂糖沒有水解作用。利用A J 5 —9 1 3 菌株所產(chǎn)的K - 卡拉膠酶對r 卡拉膠進行酶解制備r 卡拉膠寡糖，通過電噴霧離子化飛行時間質(zhì)譜( E S I —T o F —M s ) 和1 3 C —N M R 分析該酶的水解產(chǎn)物，確定該K 一卡拉膠酶專門水解r 卡拉膠3 ，6 一內(nèi)醚一D - 半乳糖殘基和4 一硫酸基一D _ 半乳糖之間的B 一1 ，4 糖苷鍵，產(chǎn)生3 ，6 一內(nèi)醚一臚半乳糖

4、作為非還原端，曠半乳糖作為還原端的1 c 一新卡拉寡糖，主要產(chǎn)物是K - 新卡拉二糖硫酸鹽、K _ 新卡拉四糖硫酸鹽、1 c 一新卡拉六糖●硫酸鹽、K 一新卡拉八糖硫酸鹽和K _ 新卡拉十糖硫酸鹽，與已報道細(xì)菌的K _ 卡拉’膠酶的酶解產(chǎn)物有所不同。寡糖的抗病毒活性實驗顯示，3 ．1 2p g ／m L 一2 0 0 肛g ／m L的1 c 一新卡拉寡接對單純皰疹病毒1 型( H S V - I ) 的吸附有抑制作用，并且呈現(xiàn)明顯的量效