1.小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向子宮內(nèi)膜腺上皮分化的蛋白質(zhì)組學(xué)研究;2.tp53單核苷酸多態(tài)性rs1042522與絨癌的相關(guān)性研究

1、復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文1.小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向子宮內(nèi)膜腺上皮分化的蛋白質(zhì)組學(xué)研究2.TP53單核苷酸多態(tài)性rs1042522與絨癌的相關(guān)性研究姓名：叢青申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：徐叢劍2012-03-21復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文一小鼠骨髓間充質(zhì)千細(xì)胞向子宮內(nèi)膜腺上皮分化的蛋白質(zhì)組學(xué)研究 中文摘要們?cè)O(shè)想子宮內(nèi)膜腺上皮來(lái)源于骨髓來(lái)源干細(xì)胞中的間充質(zhì)干細(xì)胞，若體外能夠?qū)⒐撬栝g充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)為子宮內(nèi)膜腺上皮，將具有極大的臨床治療意義

2、。在此基礎(chǔ)上，課題組開展了體外誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞( B M S C s ) 向子宮內(nèi)膜腺上皮方向分化的研究，體外將B M S C s 與子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞( E S t C s ) 間接共培養(yǎng)，r e a l t i m eR T - P C R 檢測(cè)上皮方面標(biāo)記物角蛋白7 、1 8 、1 9 、上皮膜抗原顯著增加，免疫熒光進(jìn)一步驗(yàn)證共培養(yǎng)后角蛋白顯著增加，表明骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體外共培養(yǎng)體系下可以向子宮內(nèi)膜腺上皮方向分化。為進(jìn)一步研究

3、B M S C s 向子宮內(nèi)膜腺上皮方向分化過(guò)程發(fā)生的一系列重要蛋白質(zhì)分子及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路變化，故對(duì)誘導(dǎo)前后的B M S C s 、子宮內(nèi)膜腺上皮行同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量( i s o b a r i c t a g sf o r r e l a t i v ea n d a b s o l u t eq u a n t i t a t i o n ，i T R A Q ) 蛋白質(zhì)組學(xué)分析，以獲得這一分化過(guò)程的重要蛋白分子及信號(hào)通路變化

4、信息。本課題具體分為以下三部分。第一部分，為獲取足量的未分化、分化B M S C s 、子宮內(nèi)膜腺上皮以行蛋白質(zhì)組學(xué)分析、比較，我們?cè)囵B(yǎng)并鑒定小鼠B M S C s 和E S t C s ，建立了兩種細(xì)胞的共培養(yǎng)體系促使B M S C s 向子宮內(nèi)膜腺上皮分化，并采用激光捕獲顯微切割技術(shù)獲取足量小鼠子宮內(nèi)膜腺上皮，提取五組樣品的蛋白，調(diào)整五組蛋白量后上機(jī)行i T R A Q 蛋白質(zhì)組學(xué)檢測(cè)，并通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)查找信息，明確2 0 8 種蛋

5、白名稱及其相對(duì)定量，為探尋B M S C s 向子宮內(nèi)膜腺上皮方向分化的差異蛋白分子及相關(guān)信號(hào)通路分析提供堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。第二部分，選取蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定結(jié)果中上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記進(jìn)行w e s t e r nb l o t 檢測(cè)，在對(duì)蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證的同時(shí)，進(jìn)一步說(shuō)明B M S C s向子宮內(nèi)膜腺上皮方向分化。驗(yàn)證結(jié)果表明大部分組學(xué)結(jié)果可靠，并通過(guò)進(jìn)一步驗(yàn)證隨共培養(yǎng)時(shí)間增加上皮細(xì)胞標(biāo)志物表達(dá)增加、間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物表達(dá)下降，進(jìn)一步闡明

6、了骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在共培養(yǎng)體系下隨時(shí)間進(jìn)展不斷向子宮內(nèi)膜方向分化。第三部分，為研究B M S C s 向子宮內(nèi)膜腺上皮方向分化過(guò)程發(fā)生的一系列蛋白質(zhì)分子及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路變化，選取第七天共培養(yǎng)誘導(dǎo)分化組與單獨(dú)培養(yǎng)組比值> 1 ．2 或< O ．8 3 3 的蛋白作為差異蛋白進(jìn)行分析。差異蛋白的系統(tǒng)聚類分析從整體差異蛋白水平進(jìn)一步闡明了共培養(yǎng)體系誘導(dǎo)后的分化；差異蛋白的分子功能、生物學(xué)過(guò)程、信號(hào)通路的分析顯示，能量代謝是重要基礎(chǔ)，