牛鮑計(jì)數(shù)板的使用和白細(xì)胞計(jì)數(shù)

1、臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)學(xué) 實(shí)驗(yàn)一,牛鮑計(jì)數(shù)板的使用 和白細(xì)胞計(jì)數(shù) 南通大學(xué)第二附屬醫(yī)院 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中心 陸永輝,實(shí)驗(yàn)一、 白細(xì)胞計(jì)數(shù),1.原理：血液經(jīng)稀乙酸定量稀釋并破壞成熟紅細(xì)胞，在血細(xì)胞計(jì)數(shù)池內(nèi)計(jì)數(shù)規(guī)定區(qū)域內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)，換算成每升血液中白細(xì)胞數(shù)。2.試劑器

2、材 白細(xì)胞稀釋液：冰乙酸 2.0ml 　 10g/L亞甲藍(lán) 3滴 加蒸餾水 至100ml,器材 　改良牛鮑血細(xì)胞計(jì)數(shù)板及專用蓋片、微量吸管、帶孔吸頭、1ML刻度移液管、小試管、潔凈軟紗布、干棉球、光學(xué)顯微鏡。,毛細(xì)血管采血標(biāo)準(zhǔn)操作程序,操作步驟：1 采血部位成人以左手無(wú)名指內(nèi)側(cè)為宜，半歲以下嬰幼兒通常自拇指內(nèi)

3、側(cè)或足跟兩側(cè)采血。2 輕輕按摩采血部位。3 用棉簽蘸消毒液消毒局部皮膚、待干。,4 緊捏刺血部位，使其自然充血。5 用無(wú)菌刺針穿刺取血，動(dòng)作應(yīng)迅速，深度 2～3mm，稍加擠壓以血液流出為宜。6 用干棉球擦去第一滴血。7 按需要依次采血。8 采血完畢，用干棉球壓住傷口，止血片刻。,微量吸管的使用,1將帶孔乳膠吸頭輕輕套在微量吸管上，連接緊密不漏氣；2拇指和中指夾住吸頭中下端，示指蓋住吸頭小孔，拇、中指輕微擠壓排出適量空

4、氣；3將微量吸管插入抗凝血，拇、中指緩慢松勁（松動(dòng)快血液會(huì)吸入吸頭），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有氣泡），吸管呈水平略下垂，松開示指；4用干棉球順吸管向下拭盡管外余血（保證血量準(zhǔn)確），輕觸吸管下口吸去多余血量，使管內(nèi)抗凝血正處所需刻度；5將微量吸管插入小試管底部，三指輕微用力慢慢排出血液，用上清液沖洗管內(nèi)余血2-3次，輕搖試管混勻；6拔出微量吸管棄入污物桶。,3.操作步驟（1）加稀釋液 用移液管向小試管內(nèi)加入0.

5、38ml白細(xì)胞稀釋液。（2）采血、稀釋　用微量吸管采血20ul，拭去管外余血，釋放于小試 管底部，用上部稀釋液洗凈吸管內(nèi)余血，輕搖試管混勻，靜置等其溶血。（3）清潔計(jì)數(shù)板及蓋片（動(dòng)作輕柔），夾持蓋片緣縱向前推輕放于兩側(cè)支持堤上。（4）充計(jì)數(shù)池　將小試管輕微振蕩2min，立即以一次性微量吸管吸取混勻后的白細(xì)胞懸液，充入計(jì)數(shù)池內(nèi)。靜置2-3min，使細(xì)胞沉于計(jì)數(shù)池底面。（5）調(diào)試顯微鏡 將計(jì)數(shù)板放置載物臺(tái)上，選擇（4 ×

6、; ）低倍鏡，調(diào)節(jié)聚光器使光線較暗，調(diào)節(jié)旋鈕找到方格線，轉(zhuǎn)至低倍鏡（10×），調(diào)節(jié)光亮 。（6）計(jì)數(shù) 低倍鏡下計(jì)數(shù)四角4個(gè)大方格內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)，壓線細(xì)胞數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右。,血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的方格,計(jì)數(shù)板上下各一個(gè)計(jì)數(shù)池計(jì)數(shù)區(qū)域分為9個(gè)大方格四角的大方格各劃分為16個(gè)中方格中央大方格劃分為25個(gè)中方格四角的大方格為白細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū)中央大方格四角和正中5個(gè)中方格為紅細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū),結(jié)果計(jì)算白細(xì)胞總數(shù) =4大格白細(xì)胞數(shù)（N

7、） /4×10 ×20 ×106 　　　　　　 = N÷ 20 ×109/L用△. △ ×109/L（小數(shù)點(diǎn)后一位）表示,注意事項(xiàng),⊙稀釋液，小試管、計(jì)數(shù)板⊙采血⊙充池 ⊙計(jì)數(shù)原則⊙ WBC過多⊙ WBC過少 ⊙ WBC校正⊙顯微鏡調(diào)試,5.注意事項(xiàng),(1).稀釋液密封保存，防止污染，小試管、計(jì)數(shù)板、蓋片均須清潔，以免雜質(zhì)、微粒等被誤認(rèn)為

8、細(xì)胞。(2).采血時(shí)針刺深度必須適當(dāng)，不能過度擠壓，防止組織液滲入或采血時(shí)間太長(zhǎng)引起血液凝固。(3).稀釋液和采血量要準(zhǔn)確，充分混勻，充液適量，無(wú)不足、外溢和氣泡，細(xì)胞分布均勻。(4).白細(xì)胞總數(shù)在參考范圍內(nèi)，大方格間的細(xì)胞數(shù)不得相差10個(gè)以上，兩次重復(fù)計(jì)數(shù)誤差不得超過10％。(5).白細(xì)胞數(shù)量過高時(shí)，可加大稀釋倍數(shù)，白細(xì)胞數(shù)量過低時(shí)，可計(jì)數(shù)8個(gè)大方格的白細(xì)胞數(shù)或取雙倍血量。,(6).一些貧血患者血液中有核紅細(xì)胞增多，會(huì)計(jì)數(shù)在白

9、細(xì)胞總數(shù)內(nèi)，應(yīng)校正。校正公式：白細(xì)胞校正數(shù)/L=M×（100/100+N）M為未校正前白細(xì)胞數(shù)，N為在白細(xì)胞分類時(shí)，計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞的同時(shí)計(jì)數(shù)到的有核紅細(xì)胞數(shù)。(7).調(diào)試顯微鏡將血細(xì)胞計(jì)數(shù)板平放于載物臺(tái)，低倍鏡處所充計(jì)數(shù)池正中蓋片略上方，向下微調(diào)載物臺(tái)（防止壓碎蓋片）至看清計(jì)數(shù)區(qū)域內(nèi)分隔線條為止。,6.細(xì)胞計(jì)數(shù)原則,大方格四邊壓線細(xì)胞數(shù)左不數(shù)右，數(shù)上不數(shù)下，弓形移動(dòng),7.正常參考值成人 ： （ 4.

10、0-10.0）×109/L新生兒： （15.0-20.0）×109/L,8.考核評(píng)價(jià) a. 常規(guī)考核標(biāo)準(zhǔn) （RCS）RCS= ×100%評(píng)價(jià)： 白細(xì)胞≤ 4.0×109/L者， RCS＜30%

11、 白細(xì)胞在（4.1-14.9）×109/L者 RCS＜20% 白細(xì)胞≥15.0 ×109/L者 RCS＜15% 超過上述標(biāo)準(zhǔn)者為不合格 b. 其他方法,,四大格所見白細(xì)胞最大值—最小值,四大格所見白細(xì)胞數(shù)平均值,9.思考題,1、某標(biāo)本W(wǎng)BC為11.0x109/L，分類100個(gè)WBC見到10