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1、1,實驗一 分光光度計線性分辨范圍測定,2,一、實驗?zāi)康?學(xué)習(xí)分光光度計的工作原理掌握比色測定的基本操作掌握標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作及最佳濃度范圍的確定,3,二、實驗原理,當(dāng)光線通過透明溶液介質(zhì)時,其輻射的波長有一部分被吸收,一部分透過、因此光線射出溶液之后,部分光波減少,這種光波的吸收和透過可用于某些物質(zhì)的定性定量分析。Lambert-Beer定律的適用范圍,4,從上式可以看出,一束單色光通過溶液后,光波被部分吸收,其吸收多少與溶液濃
2、度和溶液厚度(光徑)成正比對于同一臺分光光度計而言,入射光光強不變;對于某一待側(cè)物而言,摩爾消光系數(shù)為常數(shù),當(dāng)光徑也保持不變時,吸光度與溶液濃度在一定范圍內(nèi)成正比相對比較的概念,5,三、實驗材料及設(shè)備,1、儀器UV9100分光光度計2、器材普通試管:25 mL×9移液管:2 mL×1燒杯:250 mL×1洗耳球、滴管:各 2洗瓶、試管架、移液管架:各 1,6,四、試劑的配制,硫氰化鐵(
3、Fe(SCN)3)溶液稱取8.95 g KSCN 和 5.00 g FeCl3·6H2O ,蒸餾水溶解后定容至2 L藥品取用時務(wù)必規(guī)范操作!德國女科學(xué)家違規(guī)稀釋濃硫酸導(dǎo)致毀容,7,五、操作步驟,1、教師現(xiàn)場演示如何使用分光光度計2、取9支試管,按下表所示操作,8,六、結(jié)果處理,1、由0~8號管的數(shù)據(jù),以硫氰化鐵含量為橫坐標(biāo),吸光值為縱坐標(biāo),繪制曲線自學(xué)使用軟件繪制2、根據(jù)曲線分析分光光度計線性分辨范圍,9,
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