級分子生物學考題與作業(yè)匯總

1、分子生物學分子生物學閉卷閉卷一、名詞解釋一、名詞解釋8個個41、有機溶劑沉淀法有機溶劑沉淀法2、基因組基因組（genome）：是一個細胞或一種生物體的整套遺傳物質，包括基因和非編碼DNA。即該生物體的一套染色體中的完整的DNA序列。3、LCMSLCMS4、genegenetherapytherapy［基因治療］［基因治療］：（狹義）將具有正常功能的基因置換或增補患者體內有缺陷的基因，從而達到治療疾病的目的。（廣義）將某種遺傳物質轉移到患

2、者細胞內，使其在體內發(fā)揮作用，最終達到治療疾病的目的。5、RealtimeRealtime（熒光定量）（熒光定量）PCRPCR：在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。6、基因診斷：、基因診斷：即分子診斷，指通過分子生物學和分子遺傳學技術，直接檢測遺傳物質結構和表達是否異常，從而對人體的健康狀態(tài)和疾病做出診斷的方法。7、分子標記物：、分子標記物：8、逆轉錄、逆

3、轉錄PCRPCRP207P207二、問答題二、問答題8個：個：8，8，8，8，1010，8，10101、酵母雙雜交技術的原理和應用？［、酵母雙雜交技術的原理和應用？［1313、1414考題］考題］P41P412、蛋白質分離純化的基本原則？常用有哪些方法？、蛋白質分離純化的基本原則？常用有哪些方法？3、基因診斷的方法哪些？杜氏肌營養(yǎng)不良（、基因診斷的方法哪些？杜氏肌營養(yǎng)不良（DMD)DMD)的基因診斷可采用什么方法？原理與步驟如何？的基因

4、診斷可采用什么方法？原理與步驟如何？P78P78基因診斷的方法有：PCR；核酸雜交；基因芯片；bDNA；NASBA；測序。杜氏肌營養(yǎng)不良（DMD)的診斷方法：多重PCR4、pUCpUC載體常用的篩選方法是什么載體常用的篩選方法是什么原理與步驟？［］原理與步驟？［］5、寡核苷酸探針的設計原則？、寡核苷酸探針的設計原則？1)探針長度：一般要求在10～50bp。2)G／C含量為40％～60％。3)探針分子中應避免互補序列。4)避免同一堿基連續(xù)

5、出現，一般不能多于4個，如GGGG或CCCC。5)借助計算機相應軟件與已知的各種基因序列進行同源性比較。6、CtCt值的含義與作用。值的含義與作用。意義：確定初始模板的濃度。初始DNA量越多熒光達到某一值（域值）時所需要的循環(huán)數越少Log濃度與循環(huán)數呈線性關系，根據樣品擴增達到域值的循環(huán)數就可計算出樣品中所含的模板量7、閱讀文獻、閱讀文獻4原題。原題。8、骨髓干細胞的特點。、骨髓干細胞的特點?！?】名詞解釋[加灰為作業(yè)涉及的13年考題，

6、加框為新增作業(yè)題]1、生物大分子、生物大分子:具有較大的分子量，由簡單的小分子（核苷酸或氨基酸）排列組成，蘊含豐富信息并且具有復雜的空間結構。2、蛋白質組（蛋白質組（proteomeproteome）：指由一個基因組，或一個細胞、組織表達的所有蛋白質。3、ProbeProbe：核酸探針核酸探針：是指帶有某些標記物（如放射性同位素、熒光物質等）的特異性核酸序列片段，可與互補片段結合成雙鏈結構，從而檢測互補鏈的位置。4、基因芯片（基因芯片（

7、genegenechipchip）：又稱DNADNA微陣列（微陣列（microarraymicroarray），是由大量DNA或寡核苷酸探針密集排列所形成的探針陣列，其工作的基本原理是通過雜交檢測信息。5、DNAchip:DNAchip:DNADNA芯片芯片。指通過微陣列技術將高密度DNA片斷陣列通過高速機器人或原位合成方式以一定的順序或排列方式使其附著在如玻璃片等固相表面作為探針，熒光標記的樣品DNARNA借助堿基互補作用與探針進行雜

8、交，從而進行大量的基因表達及檢測等方面的研究。6、SNPSNP［單核苷酸多態(tài)性］單核苷酸多態(tài)性］：指在基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性，是決定個體差異5、酚：使蛋白質變性沉淀，抑制DNA酶活性6、PH8.0Tris溶解：保證提后DNA進入水相，避免滯留于蛋白質層。1.凝膠過濾層析凝膠過濾層析：凝膠是一種具有多孔、網狀結構的分析篩，利用這種凝膠分子篩對大小、形狀不同的分子進行層析分離，稱為凝膠層析。其原理是：當樣品溶

9、液通過凝膠柱時，相對分子量較大的物質由于直徑大于凝膠網孔而只能沿著凝膠顆粒間的孔隙，隨著溶液流動，因此流程較短，向前移動速度快而首先流出層析柱；相對分子量較小的物質直徑小于凝膠網孔，可自由的進出凝膠顆粒的網孔，在向下移動過程中，它們從凝膠內擴散到膠?？紫逗笤龠M入另一凝膠顆粒，如此不斷的進入與溢出，使流量增長，移動速率慢而最后流出層析柱；而中等大小的分子將在大、小分子物質之間被洗脫，這樣經過層析柱后，使混合物中的各物質按其分子大小不同而被

10、分離。2.巢式巢式PCRPCR（聚合酶鏈式反應聚合酶鏈式反應(Polymerase(PolymeraseChainChainReaction)Reaction)）：是指利用２對引物，第一對引物的序列在模板外側，它做PCR的擴增產物作為第二對引物退火的模板，第二對引物相對第一對引物在模板的內側，再做PCR，由此提高靈敏度和特異性的PCR技術。3.3.RealtimeRealtime（熒光定量）（熒光定量）PCRPCR：在PCR反應體系中加

11、入熒光基團，利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。4.變性變性(denaturation)(denaturation)：在某些理化因素的作用下，維系DNA分子二級結構的氫鍵和堿基堆積力受到破壞，DNA由雙螺旋變成單鏈，作為與引物結合及TapDNA聚合酶延伸的模板，此反應過程稱為變性。5.復性（復性（renaturation)renaturation)：指變性DNA在適當條件下，二條互補鏈全

12、部或部分恢復到天然雙螺旋結構的現象，它是變性的一種逆轉過程。6.解鏈溫度（融解溫度，TmTmmeltingtemperature)：DNA的變性從開始解鏈到完全解鏈是在一個相當窄的溫度內完成的使50%的DNA發(fā)生變性時的環(huán)境溫度即稱之Tm。7.增色效應：DNA變性后對260nm紫外光吸收增加的現象。8.減色效應：變性DNA復性后對260nm紫外光吸收減少的現象。9.9.退火退火（annealingannealing）：當溫度由高溫緩慢下

13、降時，熱變性的DNA單鏈在堿基互補的基礎上重新形成氫鍵開始復性的過程，稱之為“退火”。由于反應體系中引物濃度遠遠大于模板DNA濃度，且引物結構簡單，這極大地限制了變性后模板DNA單鏈之間的互補結合。編碼序列稱外顯子編碼序列稱外顯子(exon)(exon)，非編碼序列稱內含子，非編碼序列稱內含子(intron)(intron)。有些真核病毒的部分序列，對某一個基因來說是內。有些真核病毒的部分序列，對某一個基因來說是內含子，而對另一個基因而

14、言卻是外顯子。含子，而對另一個基因而言卻是外顯子。20132013年作業(yè)涉及：年作業(yè)涉及：1基因診斷：基因診斷：即分子診斷，指通過分子生物學和分子遺傳學技術，直接檢測遺傳物質結構和表達是否異常，從而對疾病作出判斷的方法。2無義突變：無義突變：是編碼某一氨基酸的三聯體密碼經堿基替換后，變成不編碼任何氨基酸的終止密碼UAA、UAG或UGA。雖然無義突變并不引起氨基酸編碼的錯誤，但由于終止密碼出現在一條mRNA的中間部位，就使翻譯時多肽鏈的終

15、止就此終止，形成一條不完整的多肽鏈。3動態(tài)突變：動態(tài)突變：動態(tài)突變也可稱為基因組不穩(wěn)定性(genomicinstability)。在研究與人類神經系統(tǒng)遺傳性疾病相關的基因時，發(fā)現患者基因中某種三核苷酸的重復拷貝數急劇增加，這種突變導致了疾病的發(fā)生。這種三核苷酸重復拷貝數增加，不僅可發(fā)生在上代的生殖細胞中而遺傳給下一代，而且在當代的體細胞中也可發(fā)生，并同樣具有表型效應。除此之外，一個個體的不同類型細胞或同一類型的不同細胞中，三核苷酸重復拷

16、貝數也可以是不同的。重復拷貝數改變后的基因的可突變性，將不同于拷貝數改變前的基因。這不同于以往發(fā)現的基因突變，所以稱之為動態(tài)突變(dynamicmutation)。4表觀遺傳：表觀遺傳：表觀遺傳是指在基因的核苷酸序列不發(fā)生改變的情況下，基因表達可遺傳的變化的現象，例如DNA甲基化，基因組印記，母體效應，基因沉默，核仁顯性，休眠轉座子激活和RNA編輯等。5miRNA：是由21~25個核苷酸組成的非編碼RNA；它通過與靶基因的3UTR的配對

17、，促進mRNA的降解或抑制mRNA的翻譯從而抑制其靶基因的表達；它在生物體生長發(fā)育、細胞增殖、分化、凋亡以及人類各種疾病的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要的調控作用。6C值悖論值悖論（Cvalueparadox）：生物體的進化程度與基因組大小之間不完全成比例的現象稱為C值矛盾7開放閱讀框架開放閱讀框架(open(openreadingreadingframeframe，F)F)：在DNA鏈上，由蛋白質合成的起始密碼開始，到終止密碼為止的一個連續(xù)編