紫外吸收光度法鑒別和測(cè)定維生素b12 注射液

1、紫外吸收光度法鑒別和測(cè)定維生素B12注射液【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】1.對(duì)照品溶液和樣品溶液的配制準(zhǔn)確稱取維生素B12對(duì)照品適量，加水溶解稀釋成25μgmL的溶液。精密吸取維生素B12注射液0.5ml于10ml容量瓶中，用水稀釋至刻度搖勻，得到待測(cè)樣品溶液（按標(biāo)示含量稀釋成25μgml的溶液）。2.吸收光譜的繪制與注射液的鑒別取對(duì)照品溶液進(jìn)行光譜掃描（250~600nm），得到維生素B12的吸收曲線，尋找吸收峰，掃描后可得到在278nm，361nm和

2、550nm波長(zhǎng)處出現(xiàn)的3個(gè)吸收峰，然后在以上3個(gè)吸收峰處測(cè)量維生素B12注射液的吸光度，并計(jì)算A361A278和A361A550的比值。3.維生素B12的定量測(cè)定根據(jù)吸收曲線選擇最大吸收波長(zhǎng)（在361nm或附近）作為測(cè)量波長(zhǎng)，測(cè)量維生素B122.使用5聯(lián)池時(shí)要注意比色皿在樣品池中的位置，不可混淆；3.測(cè)定時(shí)不要打開(kāi)儀器的樣品池蓋?！緮?shù)據(jù)記錄】WLABS550.50.142550.00.141361.00.450278.00.248277

3、.50.249【數(shù)據(jù)處理】1、定性分析E(1%1cm361.0nm)E(1%1cm277.5nm)=A(361.0nm)A(277.5nm)=1.81E(1%1cm361.0nm)E(1%1cm550.5nm)=A(361.0nm)A(550.5nm)=3.172、定量分析因?yàn)?，A(361nm)=E(1%1cm)cl，g100ml=106μg100ml=104μgml所以，cB12=A(361nm)E(1%cm)l=A(361nm)20

4、7104=0.450207104=21.74μgmlVitB12(%)=(cB12n)(500μgml)100%=(21.7420)500100%=87.0%(n為稀釋倍數(shù))【思考題】1采用吸光系數(shù)法直接測(cè)定樣品含量有何要求？2利用其他組同學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，比較同一溶液在不同儀器上測(cè)得的吸收曲線的形狀、吸收峰波長(zhǎng)以及相同濃度的吸光度有無(wú)不同，試作解釋。利用鄰組同學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，比較同一溶液在不同儀器上測(cè)得的吸收曲線的形狀、吸收峰波長(zhǎng)以及相同濃