氨基酸薄層層析

1、氨基酸薄層層析氨基酸薄層層析一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?、理解并掌握薄層層析法的原理。2、掌握氨基酸薄層層析法的正確的操作步驟。3、掌握根據(jù)不同物質(zhì)的移動(dòng)速率（Rf值）來鑒定被分離的混合物的各種組分。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理1.薄層層析原理薄層層析原理薄層層析時(shí)一般是將固體吸附劑涂布在平板上形成薄層作為固定相。當(dāng)液相（展開溶劑）在固定相上流動(dòng)時(shí)，由于吸附劑對不同氨基酸的吸附力不一樣，不同氨基酸在展開溶劑中的溶解度不一樣，點(diǎn)在薄板上的混合氨

2、基酸樣品隨著展開劑的移動(dòng)速率也不同，因而可以彼此分開。（即通過吸附解吸再吸附再解吸的反復(fù)進(jìn)行，而將樣品各組分分離開來）2.2.氨基酸與茚三酮的顯色反應(yīng)氨基酸與茚三酮的顯色反應(yīng)茚三酮水化后生成水化茚三酮，它與氨基酸的羧基反應(yīng)生成還原茚三酮、氨及醛，與此同時(shí)，還原茚三酮又與氨及茚三酮縮合生成紫紅化合物而使氨基酸斑點(diǎn)顯色。3.3.基于相對遷移率基于相對遷移率RfRf值判定混合氨基酸組分值判定混合氨基酸組分薄層層析中，物質(zhì)沿溶劑運(yùn)動(dòng)方向遷移的距

3、離與溶液前沿的距離之比為Rf值原點(diǎn)到溶劑前沿的距離距離原點(diǎn)到層析斑點(diǎn)中心的薄層層析的具體操作步驟：步驟操作（1）制板①調(diào)漿：稱取硅膠3g，加0.5%的羧甲基纖維素鈉8ml，調(diào)成均勻的糊狀②涂布：取潔凈的干燥玻璃板，均勻涂層③干燥：將玻璃板水平放置，室溫下放置0.5h，自然晾干④活化：70度下烘干60min（2）點(diǎn)樣①標(biāo)記：用鉛筆距底邊2cm水平線上均勻確定4個(gè)點(diǎn)并做好標(biāo)記。每個(gè)樣品間距1cm②點(diǎn)樣：用毛細(xì)管分別吸取丙氨酸、甘氨酸、精氨酸