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1、為控制新城疫的爆發(fā),急需研制基因工程苗.為此,從澳大利亞某大學(xué)獸醫(yī)病理系引進(jìn)一株NDV熱穩(wěn)定性天然弱毒B95株,并選取其表面抗原血凝素-神經(jīng)氨酸酶的編碼基因?yàn)槟康幕?根據(jù)國外已發(fā)表的序列,設(shè)計(jì)一對(duì)引物,利用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增出了NDVB95株HN基因.經(jīng)瓊脂糖電泳檢測,將大小與預(yù)計(jì)分子量一致的片段純化后連接到PGEM-T-easy克隆載體中,再轉(zhuǎn)化大腸桿菌TGI感受態(tài)細(xì)胞,得到的轉(zhuǎn)化子經(jīng)分子量比較、PCR鑒定和酶切分析篩選陽性克隆.
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