細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)感染犬及EgM9蛋白免疫犬引起的免疫應(yīng)答研究.pdf

1、目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)宿主抗細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)免疫的研究主要集中在宿主體內(nèi)的免疫保護(hù)、免疫逃避與免疫損傷機(jī)制。有很多關(guān)于細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)病的中間宿主的免疫抗原Eg95的研究報(bào)道，但對(duì)終末宿主犬的免疫保護(hù)抗原還在研究當(dāng)中。本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)方法與分子生物學(xué)方法，探索宿主感染細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)和EgM9蛋白免疫后，機(jī)體外周免疫系統(tǒng)、腸道的粘膜免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫應(yīng)答的情況，以期為臨床研制相關(guān)疫苗提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 本研究首先經(jīng)pET-41b重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的

2、大腸埃希菌（BL-21）對(duì)EgM9蛋白進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，通過(guò)SDS-PAGE對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行分析，證明所表達(dá)的確實(shí)為EgM9蛋白，再對(duì)其進(jìn)行純化，得到符合免疫抗原要求的EgM9重組目的蛋白。
　　 將實(shí)驗(yàn)犬分為四組（Ⅰ組：EgM9蛋白免疫組；Ⅱ組：EgM9蛋白免疫后感染原頭蚴組；Ⅲ組：直接感染原頭蚴組；Ⅳ組：空白對(duì)照組），用純化后的EgM9蛋白對(duì)Ⅰ組和Ⅱ組進(jìn)行免疫試驗(yàn)，再分別對(duì)Ⅱ組和Ⅲ組人工感染原頭蚴。將實(shí)驗(yàn)犬剖檢后進(jìn)行荷蟲(chóng)數(shù)計(jì)算，結(jié)

3、果表明用EgM9蛋白免疫犬后，可以使犬取得一定的免疫保護(hù)效果。
　　 采集實(shí)驗(yàn)犬的腸系膜淋巴結(jié)和小腸，依據(jù)免疫酶組織化學(xué)和免疫熒光組織化學(xué)原理，運(yùn)用直接法和抗原~抗體~抗體標(biāo)記物法對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)。直接法結(jié)果表明Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組犬的腸系膜淋巴結(jié)和小腸上存在IgG抗體，反應(yīng)都呈陽(yáng)性；抗原~抗體~抗體標(biāo)記物法結(jié)果表明Ⅰ組、Ⅱ組表現(xiàn)陽(yáng)性，而Ⅲ組呈陰性，熒光顯微鏡下有明顯的熒光位點(diǎn)，說(shuō)明該方法可以對(duì)免疫犬的腸系膜淋巴結(jié)和小腸上的IgG進(jìn)行定

4、位檢測(cè)。
　　 通過(guò)Real-Time PCR對(duì)上述實(shí)驗(yàn)犬的腸系膜淋巴結(jié)和小腸組織中的三種細(xì)胞因子（IL-4、TGF-β和INF-γ）檢測(cè)，表明I組和Ⅲ組實(shí)驗(yàn)犬的腸系膜淋巴結(jié)和小腸中IL-4與INF-γ均有明顯變化，IL-4的數(shù)值遠(yuǎn)高于INF-γ，而在II組中，IL-4的數(shù)值雖然也高于INF-γ，但I(xiàn)L-4與INF-γ的數(shù)值同時(shí)也高于其他兩組。結(jié)果表明不論對(duì)犬進(jìn)行免疫還是感染，都能引起Th1型和Th2型反應(yīng)，但以Th2型反應(yīng)為主