馬尾松毛蟲質型多角體病毒P44、P50蛋白的表達與定位.pdf

1、馬尾松毛蟲以松針為食，是一種危害較大的森林害蟲。馬尾松毛蟲質型多角體病毒(Dendrolimus punctatus cytoplasmic polyhedrosis virus，DpCPV)是馬尾松毛蟲的病原微生物，為我國特有物種。DpCPV在農業(yè)方面的主要用途是用做微生物殺蟲劑，具有安全、高效、無污染的特性。DpCPV的增殖主要通過直接感染目的昆蟲的方式，但是受外界環(huán)境影響較大。目前對馬尾松毛蟲質型多角體病毒的研究主要集中在對病毒自

2、身核苷酸序列及其結構的分析，而對有關核酸編碼蛋白的修飾、定位和功能的研究報道卻較少。因此深入研究DpCPV結構蛋白的修飾機制，將有助于了解病毒入侵機制，為后續(xù)馬尾松毛蟲病毒制劑的生產與蟲害的防治工作提供理論依據(jù)。
　　本研究通過分別構建DpCPV的P44和P50蛋白的原核和真核表達載體，實現(xiàn)兩者原核表達和真核共表達，研究兩者的相互作用，并對P50蛋白在昆蟲細胞內的定位進行探究。
　　研究結果顯示：DpCPV s7編碼的結構蛋

3、白P50和s8編碼的非結構蛋白P44在大腸桿菌內成功表達，與理論的蛋白分子量大小一致；免疫家兔制備多克隆抗體分別和相應的蛋白進行免疫印跡反應，鑒定了多克隆抗體的特異性；在昆蟲細胞Sf9中實現(xiàn)了P50和P44蛋白的共表達。P50在真核細胞內表達的蛋白大小與在原核細胞內表達蛋白的大小一致，P44在真核內表達的大小比原核表達的略小?？梢娫诶ハxSf9細胞內，P50蛋白不能自我剪切修飾，同時也表明P44蛋白未參與P50蛋白的切割修飾。利用激光共聚

4、焦顯微鏡觀察P50-eGFP的融合蛋白亞細胞定位發(fā)現(xiàn)，P50蛋白定位于細胞質中。
　　本研究初步探索了DpCPV不同片段所編碼的蛋白間的相互作用，同時對P50在昆蟲細胞中的定位進行了探究。實驗結果為后續(xù)研究P50蛋白的切割修飾機制提供基礎數(shù)據(jù)，同時也為探究DpCPV非結構蛋白與結構蛋白的相互作用提供了方法學參考，而對P50蛋白的定位研究則為研究其他RNA病毒中的結構蛋白表達定位提供了可參考的方法，本實驗的結果數(shù)據(jù)為探索DpCPV侵