小麥T型細(xì)胞質(zhì)雄性不育系及其保持系基因表達(dá)差異的研究.pdf

1、該研究采用了mRNA差異顯示技術(shù)對T型細(xì)胞質(zhì)雄性不育系小麥及其相應(yīng)保持系小麥的核基因進(jìn)行比較分析.提取小麥不育系及其相應(yīng)保持系單核期、雙核期和三核期3個(gè)時(shí)期6個(gè)材料的總RNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行PCR擴(kuò)增,擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物經(jīng)6％的變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離,銀染染色后可觀察到清晰的條帶.差異顯示的PCR產(chǎn)物條帶絕大部分在150bp到1000bp之間,且不育系、保持系在同一時(shí)期中絕大多數(shù)的帶型相同,證明材料本身遺傳背景良好.用11對引物組合擴(kuò)增

2、共得到58個(gè)差異,二次擴(kuò)增回收得到44個(gè)差異.其中在保持系特異表達(dá)的有21個(gè),在不育系特異表達(dá)的有23個(gè).所回收的44條差異帶,經(jīng)Reverse-Northern雜交驗(yàn)證后,確定陽性表達(dá)的cDNA片段有16個(gè),其中保持系特異表達(dá)的有12個(gè),不育系特異表達(dá)的有4個(gè).將此16個(gè)cDNA片段克隆并測序,通過與GeneBank中的數(shù)據(jù)庫比對,4個(gè)為未知基因序列,12個(gè)與已知序列有較高的同源性.其中4號片段有24個(gè)bp與actinI 100％相同

3、,肌動(dòng)蛋白對育性的影響在其他作物中已有報(bào)道.在我們的研究中,推測可能是由于細(xì)胞骨架構(gòu)建不完善,使細(xì)胞無法正常行使基本功能,從而影響小麥育性.8號片段經(jīng)比對認(rèn)為是淀粉磷酸化酶基因.由發(fā)表的淀粉磷酸化酶序列設(shè)計(jì)引物,分別在保持系、不育系三核期花藥的cDNA中進(jìn)行PCR擴(kuò)增,得到與reverse-northern雜交完全吻合的結(jié)果,即該基因確實(shí)只在保持系的三核期花藥中特異表達(dá),不育系的相應(yīng)時(shí)期沒有表達(dá),同時(shí)也可以確定此片段為淀粉磷酸化酶的基因