10985.兔oct4基因啟動子驅(qū)動rfp表達載體的構(gòu)建及驗證

1、學校代碼：10225學號：S14632學位論文兔OCT4基因啟動子驅(qū)動，RFP表達載體的構(gòu)建及驗證指導教師姓名：申請學位級別：論文提交日期：授予學位單位：李和平李善剛碩士唐瀾教授東北林業(yè)大學副教授上海交通大學醫(yī)學院2014年04月東北林業(yè)大學學科專業(yè)：動物遺傳育種與繁殖論文答辯日期：2014年6月8日授予學位日期：2014年6月答辯委員會主席：論文評閱人：聾多參櫛素大學摘要OCT4轉(zhuǎn)錄因子在維持和調(diào)控胚胎干細胞的多能性中發(fā)揮著重要的作用

2、。OCT4基因啟動子驅(qū)動標志蛋白的表達對胚胎干細胞多能性研究和iPS的建立有重要的意義。由于綠色熒光蛋白(Greenfluorescentprotein，GFP)在慢病毒轉(zhuǎn)染過程中常用作轉(zhuǎn)染標記，因此構(gòu)建兔OCT4基因啟動子驅(qū)動紅色熒光蛋白(Redfluorescentprotein，RFP)的表達，將有利于兔iPS制各的研究。本研究通過PCR方法克隆了兔的OCT4啟動子(rOCT4)，構(gòu)建了rOCT4驅(qū)動RFP的表達載體rOCT4RF

3、P，經(jīng)轉(zhuǎn)染小鼠ES細胞驗證正確后，將rOCT4RFP轉(zhuǎn)染兔成纖維細胞系獲得兔rOCT4RFP成纖維細胞。結(jié)果：經(jīng)過酶切和測序驗證，證明rOCT4RFP構(gòu)建成功，而且能夠在小鼠ES細胞系E14中表達細胞紅色熒光蛋白，而分化后的rOCT4RFP轉(zhuǎn)基因E14細胞不表達紅色熒光蛋白。通過脂質(zhì)體介導的基因轉(zhuǎn)移、抗性篩選和PCR鑒定建立了rOCT4RFP轉(zhuǎn)基因成纖維細胞系。7OCT4啟動子的甲基化與干細胞的多能性有關，為將來研究OCT4啟動子的甲基