小麥白粉菌RAPD分析及不同白粉菌種間親緣關系研究.pdf

1、從2003年6月上旬小麥生長季節(jié)開始,分別在甘肅省中西部張掖市、武威市、蘭州市、定西市等地采集新鮮小麥白粉菌標樣,對小麥白粉病菌進行常規(guī)形態(tài)鑒定和分子標記,并探討二者之間的關系,取得了以下幾方面的成績:1.利用小麥苗期離體培養(yǎng),對從中部高海拔地區(qū)田間采集的小麥白粉病菌進行生理小種鑒定及群體毒性頻率分析,結果:(1)純化菌株36份,鑒定出生理小種20個.其中優(yōu)勢小種是015,分布頻率為16.7﹪,077號為次優(yōu)勢小種.(2)群體毒性分析中

2、毒性基因V<,Era>,V<,8>,V<,1>,V<,3c>,V<,3f>頻率達70﹪以上,而V<,2,MID>,V<,20>, V<,21>,V<,4b>,V<,4>頻率在16.7﹪以下,46﹪的白粉菌毒性基因頻率高于40﹪,說明目前本省中西部的白粉菌毒性基因頻率高,含有Pm<,2+MID>,Pm<,20>,Pm<,21>,Pm<,4b>,Pm<,4>等抗病基因的品種在育種中有一定的利用價值,也表明地區(qū)間小麥白粉菌群體的毒性結構及毒性

3、頻率存在一定的差異.2.利用RAPD標記對鑒定出的16個生理小種共20個菌株進行了多樣性分析,結果表明:(1)從60條10堿基隨機引物中篩選出能產(chǎn)生穩(wěn)定多態(tài)性標記的引物35個,統(tǒng)計9個擴增結果比較明顯的隨機引物擴增得到的81個RAPD位點,主要集中在500-2000 bp之間.其中54個有多態(tài)性,多態(tài)性位點頻率占66.7﹪,而不同引物產(chǎn)生的多態(tài)性片段的比例差別較大,說明小麥白粉菌群體中有高度的遺傳分化.同時也表明RAPD分析可為該菌的群

4、體遺傳研究提供豐富的DNA分子多態(tài)性標記.(2)從聚類結果來看,武威地區(qū)與其他地區(qū)群體間遺傳距離差異較大,采自海拔較高的祁連山區(qū),田間表現(xiàn)發(fā)病比其他地區(qū)輕,這與毒力分析中毒性頻率低一致;從電泳圖譜上看,代表武威地區(qū)的16號菌株多態(tài)性高,引物S153擴增出一條分子量大約為2.8kb的高分子量帶,與其他條帶差異大,這條高分子帶可能與該生理小種某個無毒基因連鎖,需要繼續(xù)深入研究.(3)用PopGene32軟件統(tǒng)計多態(tài)性頻率為96.3﹪,比單衛(wèi)

5、星(1995)方法統(tǒng)計的66.7﹪要高的多.SPSS統(tǒng)計軟件和PopGene32軟件統(tǒng)計聚類的結果基本一致,可見在對小麥白粉菌RAPD結果分析時,兩種方法都是可行的.3.利用RAPD標記對12種白粉菌之間的親緣關系進行了研究,結果:(1)5個擴增結果比較明顯的隨機引物擴增得到的45個RAPD位點中,有38個有多態(tài)性,多態(tài)性位點頻率占84﹪,其多態(tài)性明顯要比小麥白粉菌不同菌株間的高.(2)從聚類結果來看,得到的親緣關系結果與分類地位上的屬