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文檔簡介
1、本研究從以ZM401cDNA片段為探針,在玉米基因組文庫中篩選出的陽性噬菌體克隆入手,采用亞克隆的方法,從其中一個(gè)908陽性噬菌體中獲得了1822bp的序列?;蚍治鲲@示這段序列含1215bp,命名為ZM908;采用生物學(xué)軟件對(duì)ZM908序列和結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析,表明該基因缺乏明顯的開放閱讀框架,序列中最長可能的開放閱讀框架僅編碼98個(gè)氨基酸,具有poly(A)尾部結(jié)構(gòu),RNA分子具有穩(wěn)定的二級(jí)結(jié)構(gòu),符合非編碼RNA基因的特點(diǎn),可能屬于類似于
2、mRNA的非編碼基因;ZM908與ZM401有高度保守的區(qū)段(ZM908序列中有三段和ZM401是高度保守的,分別為371-598bp,698-847bp和929-1047bp),相似性最高達(dá)到86%。玉米花粉的RT-PCR結(jié)果證明ZM908在玉米中是可轉(zhuǎn)錄的,玉米基因組Southern雜交結(jié)果表明,ZM908以單拷貝存在于玉米基因組中。 為研究ZM908基因的功能,構(gòu)建了35S啟動(dòng)子控制下的ZM908基因正向及反向的植物表達(dá)載體,
3、經(jīng)農(nóng)桿菌介導(dǎo),轉(zhuǎn)化煙草和擬南芥。經(jīng)PCR檢測,得到T0代正向和反向轉(zhuǎn)基因煙草為30株和4株;T2代正向和反向轉(zhuǎn)基因擬南芥植株為14株和6株。對(duì)轉(zhuǎn)正向ZM908基因煙草觀察發(fā)現(xiàn):花序生長緩慢,在生長過程中有脫落的現(xiàn)象發(fā)生;花粉呈黃褐色,大小不一致,并且萌發(fā)率很低,而ZM908基因以反向方式整合的轉(zhuǎn)基因煙草表現(xiàn)一切正常。對(duì)轉(zhuǎn)基因擬南芥表型觀察顯示,轉(zhuǎn)正向ZM908基因的擬南芥與非轉(zhuǎn)基因的沒有差別,花粉的掃描電鏡觀察顯示轉(zhuǎn)基因花粉除略有些凹陷
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