FAE1啟動子的功能分析.pdf

1、油菜籽油由各種脂肪酸組成，高芥酸(芥酸含量為55-60％)的菜籽油，是重要的工業(yè)原料，在鑄鋼工業(yè)中作為潤滑油，但是作為食用油時，與其他食用植物油相比，其主要特點是芥酸含量偏高(一般40-55％)，芥酸為廿二碳的長鏈脂肪酸，人體不易消化吸收，營養(yǎng)價值低。通過品質(zhì)改良后，無芥酸的菜籽油中油酸和亞油酸的含量顯著提高，亞油酸是動物油中所不具有的，只有依賴植物油的供應(yīng)，易為人體消化吸收。研究植物脂肪酸延長酶基因FAE1的啟動子，對了解長鏈脂肪酸合

2、成的分子機制以及油菜籽油成分的基因工程改良具有重要的指導(dǎo)意義。 本研究內(nèi)容主要涉及FAE1基因啟動子缺失試驗、植物表達載體的構(gòu)建、擬南芥轉(zhuǎn)化獲得轉(zhuǎn)基因植株及其分子檢測、GUS染色分析等。主要結(jié)果如下： 1、通過FAEI基因啟動子缺失試驗得到了5個5’序列部分缺失的啟動子片斷，與全長啟動子測序比對無一堿基錯誤。全長啟動子934bp，與報道的FAE1promoter序列(GenBank登錄號：AF355982)經(jīng)過同源序列比

3、較，發(fā)現(xiàn)有99.7％的同源性。 2、以雙元載體pBI121為基礎(chǔ)，構(gòu)建了含有全長及系列缺失啟動子，NOS終止子以及以Km為選擇標記，以GUS基因為報告基因的系列表達載體。表達載體經(jīng)PCR、酶切鑒定正確。 3、擬南芥inplanta方法轉(zhuǎn)化，利用Km篩選，一共獲得156株Km抗性植株，對其中107株P(guān)CR檢測得到102株陽性植株，初步表明全長及缺失啟動子己整合進擬南芥基因組中。 4、FAE1基因全長啟動子的時空表達

4、檢測表明：該啟動子在根、莖、葉、花、角果中都不表達，只在胚中表達，并且從開花后5d開始表達，在11天后達到表達量最高峰，13天后表達量減弱。推斷該啟動子的表達具有時空特異性。 5、對各啟動子缺失片斷進行功能分析，發(fā)現(xiàn)只有406bp的片斷能驅(qū)動GUS基因在種子中高水平表達。 6、經(jīng)過GUS染色分析，發(fā)現(xiàn)FAE1基因全長啟動子及各缺失片斷在轉(zhuǎn)基因植株種子萌發(fā)期及苗期都不具備啟動子功能，但是35S能在根，莖，葉中驅(qū)動GUS基因