RNA干擾沉默F(xiàn)ascin基因?qū)θ四懝馨┘?xì)胞QBC939增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的:
　　應(yīng)用慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)，探討RNA干擾沉默fascin基因的表達(dá)對(duì)人膽管癌細(xì)胞QBC939體外增殖和凋亡的影響。
　　方法:
　　采用常規(guī)方法進(jìn)行QBC939細(xì)胞的培養(yǎng)，將其分為三組，實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)染 fascin-shRNA慢病毒載體，非特異性對(duì)照組轉(zhuǎn)染shRNA陰性對(duì)照慢病毒載體，而空白對(duì)照組予以等量PBS緩沖液處理。RT-PCR及Western blot檢測各組中fascin mRNA水平和蛋白水平

2、的表達(dá)情況；通過流式細(xì)胞術(shù)PI單染檢測細(xì)胞周期，Annexin V和PI雙染檢測細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)果:
　　1、Western blot檢測發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組中fascin基因的蛋白水平表達(dá)明顯低于空白對(duì)照組及非特異性對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；
　　2、RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組fascin基因的mRNA水平表達(dá)明顯低于空白對(duì)照組及非特異性對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；
　　3、PI單染檢

3、測細(xì)胞周期發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞在 G1期所占比例明顯高于空白對(duì)照組及非特異性對(duì)照對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），并在實(shí)驗(yàn)組中可見凋亡峰，凋亡率明顯高于其余兩組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；
　　4、Annexin V和PI雙染檢測細(xì)胞凋亡發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組中凋亡率明顯高于非特異性對(duì)照組及空白對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。
　　結(jié)論:
　　1、慢病毒介導(dǎo)的shRNA能有效地沉默F(xiàn)ascin基因在膽管癌QBC