康復(fù)訓(xùn)練對(duì)腦梗死大鼠患側(cè)海馬CA1區(qū)Bcl-2和Bax的影響及其與學(xué)習(xí)記憶的關(guān)系.pdf

1、目的：腦梗死是危害人類健康的常見病、多發(fā)病，患者常有相應(yīng)的運(yùn)動(dòng)、感知覺及學(xué)習(xí)記憶功能障礙，其中學(xué)習(xí)記憶障礙最為常見、持久?？祻?fù)訓(xùn)練能明顯改善大腦神經(jīng)功能和學(xué)習(xí)記憶能力，對(duì)大腦的功能重組和代償起著重要作用。但其機(jī)制目前為止尚不十分明確，本課題通過觀察康復(fù)訓(xùn)練對(duì)腦梗死大鼠患側(cè)海馬CA1區(qū)Bcl-2和Bax的影響及其與學(xué)習(xí)記憶的關(guān)系，從細(xì)胞凋亡角度探討康復(fù)訓(xùn)練對(duì)腦梗死大鼠學(xué)習(xí)記憶能力、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的可塑性影響及其可能機(jī)制。 方法：(1

2、)研究對(duì)象和干預(yù)措施：選用雄性Wister大鼠，參照小泉線栓法制成大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈(middlecerebral artery occlusion，MCAO)腦梗死模型，術(shù)后2小時(shí)進(jìn)行模型成功評(píng)價(jià)。54只腦梗死造模成功的大鼠隨機(jī)選取8只作為24小時(shí)組，觀察腦梗死后24小時(shí)后的基礎(chǔ)Bcl-2和Bax值，其余48只隨機(jī)分為腦梗死自由活動(dòng)組(對(duì)照組)和腦梗死康復(fù)訓(xùn)練組(康復(fù)組)，每組各24只?？祻?fù)組于術(shù)后24小時(shí)開始進(jìn)行滾筒式網(wǎng)狀訓(xùn)練、轉(zhuǎn)棒

3、行走訓(xùn)練、平衡棒行走訓(xùn)練及網(wǎng)屏訓(xùn)練。對(duì)照組置于普通籠中正常喂養(yǎng)，不給予任何訓(xùn)練。(2)觀察指標(biāo)：①神經(jīng)和運(yùn)動(dòng)功能：對(duì)照組和康復(fù)組在術(shù)后各時(shí)點(diǎn)(手術(shù)后1周、2周、3周)分別進(jìn)行神經(jīng)功能(采用Bederson法)及運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分(包括轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)、平衡木實(shí)驗(yàn)、網(wǎng)屏實(shí)驗(yàn))；②學(xué)習(xí)記憶能力，對(duì)照組和康復(fù)組大鼠在術(shù)后1周、2周、3周采用Y-型迷宮進(jìn)行學(xué)習(xí)記憶能力測(cè)評(píng)；③免疫組化定位、定性、定量分析：用Bcl-2和Bax試劑盒SABC顯色法檢測(cè)患側(cè)海馬C

4、A1區(qū)Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá)情況，用原位末端標(biāo)記技術(shù)(terminaldeoxynucleotidyl transferse mediated dUTP nick end labeling，TUNEL)原位末端標(biāo)記法染色該區(qū)檢測(cè)凋亡情況，術(shù)后24小時(shí)組于術(shù)后24小時(shí)取材，康復(fù)組和對(duì)照組于術(shù)后1周、2周、3周神經(jīng)及運(yùn)動(dòng)功能測(cè)評(píng)完畢后取材。(3)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：用SPSS10.0 for WINDOWS進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。所有數(shù)值結(jié)果均用x±

5、s表示，P<0.05為差異有顯著性。對(duì)大鼠神經(jīng)功能、運(yùn)動(dòng)能力、學(xué)習(xí)記憶能力測(cè)評(píng)結(jié)果采用t檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較。對(duì)免疫組化統(tǒng)計(jì)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用單因素方差分析和t檢驗(yàn)，并用SNK-q檢驗(yàn)進(jìn)行組間差異比較。 結(jié)果：(1)神經(jīng)功能評(píng)分：在手術(shù)后1周，對(duì)照與康復(fù)組比較差異無顯著性(P>0.05)，在手術(shù)后2周和3周兩組比較差異有顯著性(P<0.05)。運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分：轉(zhuǎn)棒行走訓(xùn)練：手術(shù)后1周、2周和3周組對(duì)照組與康復(fù)組比較差異均有顯著性(P

6、<0.05)；平衡木步行訓(xùn)練：手術(shù)后1周對(duì)照組與康復(fù)組比較差異無顯著性(P>0.05)，在手術(shù)后2周和3周比較差異有顯著性(P<0.05)；網(wǎng)屏實(shí)驗(yàn)：對(duì)照組在手術(shù)后1周與康復(fù)組比較差異無顯著性(P>0.05)，在手術(shù)后2周和3周比較差異有顯著性(P<0.05)。(2)學(xué)習(xí)記憶能力測(cè)評(píng)：康復(fù)組和對(duì)照組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)處死前進(jìn)行學(xué)習(xí)記憶能力測(cè)評(píng)，康復(fù)組大鼠Y-迷宮分辨學(xué)習(xí)能力康復(fù)各組均明顯優(yōu)于對(duì)照組(P<0.05)。(3)Bcl-2免疫組化染

7、色結(jié)果及陽性產(chǎn)物圖像分析儀統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果：海馬CAl區(qū)Bcl-2蛋白表達(dá)陽性神經(jīng)元在對(duì)照組呈現(xiàn)出隨著時(shí)間的推移而逐漸下降的趨勢(shì)，而在康復(fù)組則呈現(xiàn)為先上升再下降的趨勢(shì)，在每個(gè)時(shí)間段上，康復(fù)組Bcl-2蛋白表達(dá)陽性神經(jīng)元數(shù)均比對(duì)照組多，該差異具有顯著性(P<0.05)。Bax免疫組化染色結(jié)果及陽性產(chǎn)物圖像分析儀統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果：康復(fù)組及對(duì)照組均隨著時(shí)間的推移呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)，但兩組在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均表現(xiàn)為：康復(fù)組的Bax蛋白表達(dá)陽性神經(jīng)元數(shù)比對(duì)照組少，

8、該差異具有顯著性(P<0.05)。TUNEL染色結(jié)果：各組大鼠海馬CAl區(qū)均可見TUNEL陽性神經(jīng)元細(xì)胞，主要分布于錐體細(xì)胞和顆粒細(xì)胞層。從凋亡指數(shù)(apoptosis index，AI，AI=視野內(nèi)凋亡細(xì)胞個(gè)數(shù)/視野內(nèi)所有神經(jīng)細(xì)胞個(gè)數(shù)x100％)分析：對(duì)照組凋亡指數(shù)先上升，隨后緩慢下降，而康復(fù)組的凋亡指數(shù)則一直處于下降的狀態(tài)，而且，在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)上，對(duì)照組的凋亡指數(shù)高于康復(fù)組(P<0.05)。 結(jié)論：①康復(fù)訓(xùn)練增加海馬CA1區(qū)B