胞漿型磷脂酶A2活化表達(dá)與高血壓心臟重構(gòu)關(guān)系的研究.pdf

1、目的：探討活化的胞漿型PLA2與高血壓心臟重構(gòu)的關(guān)系，本研究利用電鏡觀察4、8、16、24周齡SHR左心室心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化，圍繞ERK1/2的調(diào)節(jié)通路，免疫組化法檢測(cè)不同周齡SHR左心室壁（內(nèi)縱層、中環(huán)層、外斜層）、室間隔ERK1/2下游調(diào)節(jié)因子cPLA2的表達(dá)，Western-blotting法檢測(cè)p-cPLA2，p-MEK，p-ERK1/2的表達(dá)，從細(xì)胞信號(hào)通路轉(zhuǎn)導(dǎo)方面分析高血壓狀態(tài)下cPLA2是否參與了高血壓心臟重構(gòu)，進(jìn)一步明

2、確ERK1/2參與高血壓心臟重構(gòu)作用的可能調(diào)節(jié)機(jī)制。
　　方法：動(dòng)物分組：①原發(fā)性高血壓（SpontaneouslyHypertensiveRats，SHR）組：4周齡組（SHR4），8周齡組（SHR8），16周齡組（SHR16），24周齡組（SHR24），每組各6只；②WKY（Wistar-Kyoto）大鼠作為對(duì)照組：4周齡組（WKY4），8周齡組（WKY8），16周齡組（WKY16），24周齡組（WKY24），每組各6只。HE

3、染色，光鏡測(cè)微尺測(cè)量4、8、16、24周齡SHR心臟重構(gòu)改變，觀察組織學(xué)改變，利用透射電鏡觀察各年齡段SHR心肌超微結(jié)構(gòu)變化，免疫組化法檢測(cè)不同周齡SHR大鼠左心室壁（內(nèi)縱層、中環(huán)層、外斜層）、室間隔p-cPLA2的表達(dá)，Western-blotting法檢測(cè)cPLA2，p-MEK，p-ERK1/2的表達(dá)。
　　結(jié)果：1、血壓變化：WKY血壓保持在正常水平（107.65±6.55mmHg）。SHR組從8周齡開始血壓升高，SHR8、

4、SHR16、SHR24組動(dòng)脈收縮壓均明顯高于同周齡WKY組（P<0.05）；2、心臟/體重比值改變：隨著大鼠周齡的增加SHR和WKY大鼠的心臟/體重比值逐漸增加，16、24周齡SHR的心臟/體重比值明顯高于4周齡SHR（P<0.05）,與同周齡WKY大鼠比值比較，16、24周齡SHR的心臟/體重比值明顯高于WKY大鼠（P<0.05）；心臟相對(duì)腔室厚度變化：SHR組相對(duì)左心室壁厚度隨周齡增加，逐漸增加，以左心室肌內(nèi)層和中層厚度增加明顯，1

5、6、24周SHR相對(duì)左心室壁厚度明顯高于16、24周WKY大鼠（P<0.05）。16、24周齡SHR組相對(duì)左心室壁厚度明顯高于SHR4組（P<0.05）；組織學(xué)改變：心肌組織HE切片觀察，正常血壓對(duì)照組WKY組大鼠心肌排列整齊，基本結(jié)構(gòu)清晰。與之相對(duì)應(yīng)SHR組心臟基本結(jié)構(gòu)存在，心肌排列整體比較整齊，個(gè)別區(qū)域心肌排列紊亂，心肌細(xì)胞體積普遍增大，心肌細(xì)胞長(zhǎng)度增加，偶見雙核。SHR組心肌間質(zhì)血管壁較WKY組明顯增厚。3、心肌超微結(jié)構(gòu)變化：WK

6、Y組心肌肌膜光滑平坦，線粒體、潤(rùn)盤無(wú)明顯病理表現(xiàn)，間質(zhì)血管正常。與之相比較，8、16周齡SHR心肌細(xì)胞內(nèi)可見膨脹增大的線粒體，基質(zhì)內(nèi)嵴結(jié)構(gòu)模糊，部分線粒體呈羽毛狀溶解壞死。肌漿網(wǎng)池?cái)U(kuò)張不平坦呈泡狀突出，少部分線粒體溶解，到SHR24上述心肌細(xì)胞變化更為明顯。SHR24潤(rùn)盤明顯減少，部分潤(rùn)盤局部縫隙有擴(kuò)張，可見異常球形膨大，潤(rùn)盤走行紊亂屈曲；SHR心肌間毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增生明顯，血管壁明顯增厚，血管腔狹窄變形；心肌間質(zhì)及血管旁可見增生的成

7、纖維細(xì)胞，膠原增多。4、磷酸化cPLA2在心臟各部位的檢測(cè)結(jié)果：磷酸化cPLA2免疫組組織化學(xué)陽(yáng)性表現(xiàn)為心肌細(xì)胞細(xì)胞漿內(nèi)有棕黃色或淡黃色顆粒沉著，隨實(shí)驗(yàn)大鼠的周齡與心臟部位不同，其表達(dá)范圍也不同，大鼠心臟左心室壁和室間隔，磷酸化cPLA2在SHR的表達(dá)均隨周齡的增加逐漸增加，心室壁各層表達(dá)情況:在左心室壁內(nèi)層SHR16、SHR24的表達(dá)陽(yáng)性率分別為76.38％、78.56%，明顯高于WKY16、WKY24陽(yáng)性率51.52%、53.74%

8、；在左心室壁中層SHR16、SHR24的表達(dá)陽(yáng)性率分別為75.03%、82.03%，明顯高于WKY16、WKY24大鼠陽(yáng)性率46.51%、55.67%；在左心室壁外層SHR24的表達(dá)陽(yáng)性率78.53%，明顯高于WKY24大鼠陽(yáng)性率56.74%；磷酸化cPLA2在室間隔與在左心室壁上的表達(dá)規(guī)律不同：SHR24組大鼠的室間隔左心室面磷酸化cPLA2表達(dá)陽(yáng)性率50.12%，明顯高于WKY24組表達(dá)陽(yáng)性率29.87%；室間隔右心室面磷酸化cPL

9、A2表達(dá)各組無(wú)顯著性差異；磷酸化cPLA2在SHR4的左心室壁內(nèi)層和中層的表達(dá)明顯高于室間隔左、右心室面的表達(dá)（P<0.05）。在SHR24大鼠左心室壁的內(nèi)、中、外三層的表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于室間隔右心室面的陽(yáng)性率（P<0.05），室間隔左心室面的表達(dá)與右心室面的表達(dá)無(wú)顯著性差異。5、Westernblot檢測(cè)也證明了隨周齡增加SHR心臟中磷酸化cPLA2蛋白含量逐漸增高這一結(jié)果。6、大鼠心臟磷酸化MEK檢測(cè)結(jié)果:SHR24心臟中磷酸化ME

10、K1/2蛋白含量高于SHR8，SHR24心臟中磷酸化MEK1/2蛋白含量較WKY24組大鼠高。7、大鼠心臟磷酸化ERK檢測(cè)結(jié)果:SHR24心臟中磷酸化ERK1/2蛋白含量高于SHR8，SHR24心臟中磷酸化ERK1/2蛋白含量較WKY24組大鼠高。
　　結(jié)論：（1）SHR高血壓大鼠心臟重構(gòu)以左心室肥厚為主。（2）心肌細(xì)胞增殖/凋亡失衡，心肌間血管重構(gòu)和心肌纖維化共同參與了SHR心臟重構(gòu)。（3）MEK1/2-ERK1/2-cPlA2