CTAB透性化酵母細(xì)胞為核絲素蛋白為衣的載藥雙壁微球的制備和性能考察.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)旨在制備出一種以CTAB透性化處理的酵母細(xì)胞為核，絲素蛋白為殼的雙壁微球，將降壓藥物卡維地洛載入細(xì)胞中達(dá)到較好的釋放效果。所以在選擇雙壁微球的核材料和殼材料都尤為重要。根據(jù)大量參考文獻(xiàn)可以確定絲素蛋白是一種優(yōu)良的殼材料，另外根據(jù)我們之前的基礎(chǔ)研究推測(cè)，酵母細(xì)胞通過(guò)CTAB透性化處理后有可能成為一種優(yōu)良的核材料。依據(jù)以上分析做了如下實(shí)驗(yàn)。
　　方法：第一部分:以紫外分光光度計(jì)在波長(zhǎng)200nm-400nm范圍內(nèi)對(duì)卡維地洛溶

2、液進(jìn)行掃描確定其最大吸收波長(zhǎng)。對(duì)卡維地洛-酵母細(xì)胞微球的載藥量測(cè)定方法的建立，對(duì)酵母細(xì)胞載藥后和對(duì)其包衣后體外釋放的測(cè)定方法的建立。第二部分:以未處理的、CTAB、NaCl和酸-堿分別處理的酵母細(xì)胞，利用PCM觀察其表面形態(tài)變化，用TEM觀察細(xì)胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)變化，用FT-IR、DSC和TGA圖譜分析細(xì)胞處理后的結(jié)構(gòu)成分變化，用共聚焦顯微鏡分析細(xì)胞不同處理后的透性化效果。第三部分:CTAB、NaCl和酸-堿處理的酵母細(xì)胞分別載入藥物卡維地洛

3、，以紫外分光光度計(jì)測(cè)定其載藥量，用FT-IR、DSC和TGA分析載入藥物后細(xì)胞結(jié)構(gòu)成分的變化。第四部分:選擇CTAB處理的酵母細(xì)胞做體外釋放，因?yàn)榇颂幚矸椒ㄓ休^高的載藥量而且根據(jù)前面的分析細(xì)胞的完整性也保持的較好，再利用絲素蛋白對(duì)載藥的酵母細(xì)胞進(jìn)行包衣成雙壁微球，并與未包衣的酵母細(xì)胞進(jìn)行體外釋放比較。以SEM觀察絲素蛋白對(duì)載藥的酵母細(xì)胞微球的包衣效果。
　　結(jié)果：第一部分:通過(guò)用紫外分光光度計(jì)在波長(zhǎng)200nm-400nm范圍內(nèi)對(duì)卡

4、維地洛溶液進(jìn)行掃描，確定其最大吸收波長(zhǎng)為240nm。通過(guò)對(duì)卡維地洛-酵母細(xì)胞微球的載藥量測(cè)定方法的建立，對(duì)酵母細(xì)胞載藥后和對(duì)其包衣后體外釋放的測(cè)定方法的建立，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，該方法準(zhǔn)確可靠、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單。第二部分:以未處理的酵母細(xì)胞、CTAB、NaCl、和酸-堿處理的酵母細(xì)胞四個(gè)樣品，在相差顯微鏡下觀察到前三個(gè)樣品的形態(tài)都是圓球形，而酸-堿處理的細(xì)胞呈現(xiàn)出不規(guī)則形態(tài)且高度聚集。還可以看到CTAB處理的酵母細(xì)胞壁內(nèi)側(cè)有明顯的“黑點(diǎn)”，

5、NaCl處理的酵母細(xì)胞發(fā)生了質(zhì)壁分離，多數(shù)細(xì)胞呈現(xiàn)出不規(guī)則形態(tài)，僅有少數(shù)細(xì)胞仍然呈橢圓形，酸-堿處理得酵母細(xì)胞沒有出現(xiàn)黑點(diǎn)且顏色很淺。TEM觀察到CTAB處理的酵母細(xì)胞基本上保持細(xì)胞的完整性，NaCl處理的酵母細(xì)胞有部分已破損，酸-堿處理酵母細(xì)胞已絕大部分破損。FT-IR、DSC和TGA圖譜顯示出酵母細(xì)胞經(jīng)過(guò)不同處理后在結(jié)構(gòu)組成上的部分變化。共聚焦顯微鏡可以觀察出CTAB處理的酵母細(xì)胞染色最深且整個(gè)細(xì)胞均被染色，NaCl處理的酵母細(xì)胞和

6、酸-堿處理酵母細(xì)胞基本上都沒有被染色上，說(shuō)明CTAB處理后酵母細(xì)胞通透性增加。第三部分:以CTAB、NaCl和酸-堿分別處理的酵母細(xì)胞再分別載入藥物卡維地洛，以紫外分光光度計(jì)測(cè)定其載藥量分別為29.3％、10.51％、2.74％。FT-IR、DSC和TGA圖譜與載入藥物之前的細(xì)胞相比也有相應(yīng)的變化。第四部分:CTAB處理的酵母細(xì)胞載藥的體外胃模擬釋放在2h時(shí)為92.2％，而包衣后即利用絲素蛋白對(duì)載藥的CTAB處理的酵母細(xì)胞進(jìn)行包衣后的體

7、外胃模擬釋放在2.0h為45％，24h時(shí)達(dá)到90.4％，所以利用絲素蛋白對(duì)酵母細(xì)胞包衣成雙壁微球后達(dá)到較就明顯的緩釋作用。SEM圖可以觀察絲素蛋白在酵母細(xì)胞微球表面形成的包衣。
　　結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)建立了利用CTAB透性化處理酵母細(xì)胞的方法，與其他處理方法相比有更高的載藥量和對(duì)細(xì)胞本身的完整性保持更好。并且本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)載藥的細(xì)胞用絲素蛋白進(jìn)行包衣，使之成為以CTAB透性化處理酵母細(xì)胞為核和以絲素蛋白包衣層為殼的雙壁微球材料，可以較好的