小膠質(zhì)細(xì)胞EGFR通路調(diào)控對(duì)脊髓損傷與修復(fù)的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：文獻(xiàn)提示活化小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)在脊髓創(chuàng)傷繼發(fā)性損傷中起重要作用；EGFR通路和小膠質(zhì)細(xì)胞的活化有一定的相關(guān)性。本研究旨在探討EGFR通路的激活與小膠質(zhì)細(xì)胞活化相關(guān)炎癥的關(guān)系，EGFR抑制劑對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞活化相關(guān)炎癥的影響，以及EGFR抑制劑對(duì)脊髓繼發(fā)性損傷和損傷后修復(fù)的影響。
　　 方法：LPS刺激模擬小膠質(zhì)細(xì)胞的炎癥活化，自由落體打擊法建立脊髓創(chuàng)傷大鼠模型。C225或AG1478干預(yù)活化細(xì)胞或損傷動(dòng)物。逆轉(zhuǎn)錄PCR和

2、ELISA檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞的IL-1β和TNFa的合成和分泌；免疫熒光法觀察小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)變化，pEGFR的表達(dá)，脊髓損傷后膠質(zhì)細(xì)胞的活化以及血管的改變；Western Blot檢測(cè)EGFR、pEGFR、MAPKs、IL-1β和TNFa的表達(dá)；鈣成像技術(shù)和鈣抑制實(shí)驗(yàn)檢測(cè)鈣活動(dòng)在LPS誘導(dǎo)的EGFR磷酸化中的作用；干濕重法評(píng)價(jià)水腫程度；軸突示蹤檢測(cè)軸突修復(fù)；BBB評(píng)分和CBS評(píng)分評(píng)估神經(jīng)功能的恢復(fù)。
　　 結(jié)果：1）LPS 誘導(dǎo)小膠

3、質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)活化形態(tài)，pEGFR表達(dá)增高，以及IL-1β和TNFa的mRNA表達(dá)和培養(yǎng)上清液中蛋白含量的顯著增高；與LPS 誘導(dǎo)組相比，這些變化在C225干預(yù)組和AG1478 干預(yù)組被明顯抑制。2）LPS 刺激可迅速引起小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)的鈣活動(dòng)；EGFR的磷酸化可以被BAPTA/AM或KN62 抑制，但是不能被EGTA 抑制。3）LPS 誘導(dǎo)BV2細(xì)胞Erk1/2、JNK和p38的磷酸化增加，以及IL-1β和TNFa的表達(dá)升高；此現(xiàn)象可以被C

4、225和AG1478 緩解。U0126，SP600125和SB203580不同程度抑制了LPS 誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞的IL-1β和TNFa表達(dá)。4）在脊髓損傷后，pEGFR的表達(dá)顯著增高，并定位于活化的小膠質(zhì)細(xì)胞。5）C225和AG1478 抑制脊髓損傷區(qū)pEGFR、Erk1/2和p38MAPK的表達(dá)，減少IL-1β和TNFa的表達(dá)，減輕組織含水量，減輕膠質(zhì)細(xì)胞活化，并緩解脊髓損傷灶附近血管的擴(kuò)張和高通透性改變；干預(yù)同時(shí)減輕了膠質(zhì)疤痕的形成