實時熒光定量PCR法檢測雙歧桿菌對小鼠腸道菌群影響的研究.pdf

1、動物腸道菌群的微生態(tài)平衡與宿主的健康及疾病有著密切的關(guān)系?？股氐膽檬菍е聞游锬c道菌群失調(diào)的主要原因之一。雙歧桿菌除了具有增強免疫、抗腫瘤和抗衰老等多種生理功能之外，其通過拮抗、抑制和營養(yǎng)等作用能調(diào)整腸道菌群的平衡。本實驗所用雙歧桿菌菌株BBMNo1源自世界第五長壽之鄉(xiāng)-廣西巴馬瑤族自治縣長壽老人糞便，其具有良好的耐酸耐膽鹽能力和人工胃腸液耐受性，并具有很好的細胞黏附性。為其運用于實際生產(chǎn)，了解其對腸道菌群是否具有調(diào)節(jié)作用是必要的。

2、 目前考察益生菌株對小鼠腸道菌群影響運用的檢測方法，主要是傳統(tǒng)分離培養(yǎng)法、傳統(tǒng)PCR定量法和實時熒光定量PCR法。本實驗采用雙歧桿菌、乳桿菌、腸桿菌、腸球菌的特異性引物，并用SYBR Green進行了實時定量聚合酶鏈式反應。30μL反應體系組成確定為：SYBR(R)Green Realtime PCR Master Mix 15μL，上下游引物各1μL，模板2μL，蒸餾水12μL。反應程序最終確定為：各細菌先經(jīng)過95℃5min的變

3、性，之后雙歧桿菌95℃15s，59℃30s，72℃30s共40個循環(huán)，乳桿菌95℃15s，61℃30s，72℃30s共40個循環(huán)，腸桿菌95℃15s，61℃30s，72℃30s共35個循環(huán)，腸球菌95℃15s，61℃30s，72℃30s共40個循環(huán)。在合適的條件下做出了標準曲線。 然后，用建立的實時熒光定量PCR方法檢測了BBMN01對小鼠腸道菌群的影響，結(jié)果顯示，BBMN01對正常小鼠腸道菌群具有改善作用，對已失調(diào)菌群具有顯著