Smad4失活和KrasG12D活化對(duì)結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的協(xié)同效應(yīng)研究.pdf

1、【目的】
　　 研究Smad4 失活和Kras G12D 活化對(duì)結(jié)腸癌CT26細(xì)胞肝轉(zhuǎn)移的協(xié)同效應(yīng)。
　　 【方法】
　　 利用RNAi 技術(shù)敲減CT26細(xì)胞Smad4的表達(dá)，建立穩(wěn)定的CT26-Smad4KD細(xì)胞系。用MTT 法檢測(cè)Smad4 低表達(dá)對(duì)CT26細(xì)胞增殖的影響。
　　 將CT26細(xì)胞，轉(zhuǎn)染了空載體的CT26-Vector細(xì)胞以及CT26-Smad4KD細(xì)胞分別接種至Balb/c 裸鼠皮下，

2、4周后處死裸鼠，通過(guò)測(cè)量腫瘤體積的大小，觀(guān)察Smad4低表達(dá)以后對(duì)CT26細(xì)胞成瘤能力的影響。劃痕實(shí)驗(yàn)（Wound-Healing Assay）比較Smad4 低表達(dá)對(duì)CT26細(xì)胞遷移能力的影響。
　　 【結(jié)果】
　　 RNAi 技術(shù)能夠穩(wěn)定有效的敲減Smad4的表達(dá)，其效率在85％以上。CT26細(xì)胞經(jīng)TGF-β處理后增殖速度要慢于未經(jīng)處理的細(xì)胞，P＜0.05；經(jīng)TGF-β處理后CT26-Smad4KD細(xì)胞增殖要快于其對(duì)

3、照組細(xì)胞，P＜0.05。Balb/c 裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)證實(shí)CT26-Smad4KD細(xì)胞形成的腫瘤較對(duì)照組小約50％，P＜0.05。劃痕實(shí)驗(yàn)表明在TGF-β作用下CT26細(xì)胞的遷移快于未經(jīng)處理的細(xì)胞，而CT26-Smad4KD細(xì)胞的遷移速率慢于其對(duì)照組細(xì)胞。
　　 【結(jié)論】
　　 TGF-β能夠抑制CT26細(xì)胞的增殖，而Smad4 低表達(dá)能夠拮抗這一作用。Smad4 敲減能夠抑制CT26細(xì)胞在裸鼠皮下的腫瘤形成。Smad4