茶樹毛狀根培養(yǎng)及其生物合成茶氨酸的研究.pdf

1、毛狀根及利用毛狀根生物合成有用代謝產(chǎn)物是近十幾年來(lái)研究的熱點(diǎn)，而有關(guān)茶樹毛狀根的研究報(bào)道至今卻很少。本研究從茶樹毛狀根種質(zhì)保存、培養(yǎng)基優(yōu)化、增殖、生長(zhǎng)規(guī)律及茶氨酸合成等進(jìn)行了較系統(tǒng)的研究。實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果歸納如下： 1>茶樹毛狀根在本實(shí)驗(yàn)中的8種培養(yǎng)基上都誘導(dǎo)出了愈傷組織，其中在B5+NAA0.5mg/L+BA1mg/L培養(yǎng)基上的愈傷組織誘導(dǎo)率為100﹪，該種培養(yǎng)基上誘導(dǎo)的愈傷組織有再生毛狀根的能力。再生的毛狀根容易產(chǎn)生瘤狀物，此瘤

2、狀物適應(yīng)性、分化能力強(qiáng)，是種質(zhì)保存的良好材料。 2>茶樹毛狀根在改良1/2MS-1和改良1/2MS-2培養(yǎng)基上能夠保持良好的生長(zhǎng)狀態(tài)；單獨(dú)添加Al3+對(duì)毛狀根生長(zhǎng)有抑制作用，添加F-可以緩解Al3+對(duì)毛狀根生長(zhǎng)的抑制作用；不同組分培養(yǎng)基交叉培養(yǎng)或固、液培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換培養(yǎng)可保持毛狀根快速生長(zhǎng)的特性。毛狀根培養(yǎng)中，以搖床轉(zhuǎn)速100r/min，培養(yǎng)溫度25℃為宜，當(dāng)用150ml培養(yǎng)瓶時(shí)，裝液量為20-30ml為宜。 3>同一培養(yǎng)液

3、培養(yǎng)的毛狀根增重在第0-20d增加比較緩慢，第20-40d迅速增加，其后增重速度逐漸減慢。 4>篩選出了生長(zhǎng)速度較快，性狀穩(wěn)定的毛狀根株系——AG45。 5>在培養(yǎng)基中添加不同濃度鹽酸乙胺的單因子試驗(yàn)中，未添加鹽酸乙胺培養(yǎng)基培養(yǎng)的毛狀根，茶氨酸含量最高，達(dá)37.853mg/g，添加鹽酸乙胺10mmol/L時(shí)，茶氨酸含量最低；在添加不同濃度鹽酸乙胺、L-谷氨酸鈉及IBA正交試驗(yàn)中，添加鹽酸乙胺20mmol/L，L-谷氨酸鈉

4、0mmol/L，IBA0.3mg/L于液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)的毛狀根內(nèi)含茶氨酸最高，達(dá)44.08mg/g。 6>單獨(dú)添加鹽酸乙胺的培養(yǎng)液培養(yǎng)的毛狀根，其茶氨酸含量在培養(yǎng)第15d左右達(dá)到最高，隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，茶氨酸含量逐漸降低。 7>毛狀根在添加鹽酸乙胺的培養(yǎng)液中培養(yǎng)后，其內(nèi)含的氨基酸都發(fā)生了變化，在一定鹽酸乙胺濃度范圍內(nèi)，精氨酸含量隨著鹽酸乙胺的濃度的增加呈現(xiàn)正相關(guān)。γ-氨基丁酸占毛狀根中氨基酸含量的6-7﹪。茶氨酸在毛狀根內(nèi)