β1，4半乳糖基轉(zhuǎn)移酶V與星型膠質(zhì)細(xì)胞瘤惡性表型關(guān)系的研究.pdf

1、βl，4-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶V(GaITV)是βl，4-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶(βl,4-Gait)家族成員之一。在以往的研究中發(fā)現(xiàn)，GaITV的表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤的惡性程度呈正相關(guān)。在星型膠質(zhì)細(xì)胞瘤SHG44細(xì)胞中，過(guò)表達(dá)GaITV可以加快細(xì)胞生長(zhǎng)速率，增加細(xì)胞在軟瓊脂上的集落形成數(shù)，促進(jìn)了SHG44細(xì)胞的惡性程度。同時(shí)，大量的研究己表明，由細(xì)胞表面黏附分子——整合素(integrin)介導(dǎo)的細(xì)胞黏附、遷移能力的變化與腫瘤細(xì)胞的惡性表型密切相關(guān)。

2、 整合素integrin由α和β亞基組成。β1亞基是一個(gè)N一糖基化蛋白，其糖鏈的修飾是依次在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體中進(jìn)行的，在糖鏈的加工過(guò)程中，形成了分布于胞內(nèi)的未成熟型(105kD)和定位于細(xì)胞膜的成熟型(125kD)integrinD1亞基。我們發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照相比，在轉(zhuǎn)染反義GaitV的SHG44細(xì)胞中(GaitV-AS／SHG44)，細(xì)胞表面integrinβ1明顯增多，同時(shí)伴隨有105kD型式的integrinβ1減少，125kD

3、型式的integrinβ1增多；通過(guò)糖苷內(nèi)切酶EndoH消化實(shí)驗(yàn)，我們進(jìn)一步確證了105kD型式的integirnβl是糖鏈修飾不完全的未成熟型；在GaITV-AS／SHG44細(xì)胞中，integrinβ1除了與高爾基體共定位外，還呈簇狀分布于胞內(nèi)接近細(xì)胞膜的位置。這一結(jié)果表明，下調(diào)GaITV的表達(dá)，可以干涉integrinβl的糖基化修飾過(guò)程，影響了integrinpl的成熟及細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)。與之相應(yīng)，進(jìn)一步研究表明，隨著細(xì)胞表面integ

4、rinp1的減少，integrinβ1和α5的相互作用和integrin下游信號(hào)分子粘著斑激酶FAK的磷酸化水平都降低，進(jìn)而導(dǎo)致GaITV-AS／SHG44細(xì)胞在Fn上的黏附能力增強(qiáng)、遷移能力下降。 為了研究GaITV在腦星型膠質(zhì)瘤中的特異性轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制，我們構(gòu)建了一系列GaITV啟動(dòng)子區(qū)的缺失突變體。我們發(fā)現(xiàn)，-200～+120啟動(dòng)子區(qū)域?qū)S持GaITV在SHG44細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄至關(guān)重要，并且這一啟動(dòng)子區(qū)域在SHG44細(xì)胞中的轉(zhuǎn)

5、錄活性相對(duì)較高。對(duì)這一區(qū)域的分析表明，其中有轉(zhuǎn)錄因子E1AF的結(jié)合序列。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，E1AF在SHG44細(xì)胞中高表達(dá)，并能夠促進(jìn)GaITV-200～+120啟動(dòng)子區(qū)域的轉(zhuǎn)錄活性。 綜上所述，我們認(rèn)為腦星型膠質(zhì)瘤SHG44細(xì)胞通過(guò)特異性表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子E1AF，促進(jìn)了GaITV的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而影響了integrinβl的成熟與細(xì)胞膜定位，改變了細(xì)胞對(duì)Fn的黏附、遷移能力。 吡咯喹呤醌(pyrroloquinolinequino