激素對(duì)人子宮骨膜β1,4-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶Ⅰ表達(dá)的影響及與EGFR信號(hào)通路相關(guān)性研究.pdf

1、目的:
　　 探討雌、孕激素作用下，著床前子宮內(nèi)膜（RL95-2細(xì)胞）β1，4-GalT-Ⅰ表達(dá)變化及對(duì)胚胎與子宮內(nèi)膜黏附的影響，分析不同雌、孕激素作用下對(duì)EGFR相關(guān)信號(hào)通路表達(dá)的影響，調(diào)控子宮內(nèi)膜β1，4-GalT-Ⅰ表達(dá)后EGFR表達(dá)的相應(yīng)變化，進(jìn)一步分析子宮內(nèi)膜β1，4-GalT-Ⅰ調(diào)控胚胎著床的分子機(jī)制，探討與EGFR信號(hào)通路的相關(guān)性。
　　 方法:
　　 (1)通過(guò)體外著床模型（以人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞RL

2、95-2模擬著床前子宮內(nèi)膜，以人絨毛癌細(xì)胞JAR模擬著床前胚胎），改變子宮內(nèi)膜環(huán)境雌、孕激素的水平:免疫印跡技術(shù)檢測(cè)雌、孕激素對(duì)子宮內(nèi)膜β1，4-GalT-Ⅰ表達(dá)的影響，免疫細(xì)胞化學(xué)染色分析雌、孕激素對(duì)β1，4-GalT-Ⅰ半乳糖基化的改變;RCA-1Lectin-blot技術(shù)分析雌、孕激素作用下Galβ1-4GlcNAc糖蛋白分支形成情況;檢測(cè)雌、孕激素影響子宮內(nèi)膜EGFR相關(guān)信號(hào)通路蛋白表達(dá)水平;免疫印跡技術(shù)分析孕激素水平與p-EG

3、FR表達(dá)相關(guān)性;計(jì)數(shù)JAR細(xì)胞在RL95-2細(xì)胞上黏附率，分析與雌、孕激素水平的關(guān)系;(2)將β1，4-GalTⅠ基因過(guò)表達(dá)質(zhì)粒、干擾質(zhì)粒、空質(zhì)粒和干擾對(duì)照質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染RL95-2細(xì)胞，分析調(diào)控子宮內(nèi)膜β1，4-GalTⅠ表達(dá)水平后，JAR細(xì)胞在RL95-2細(xì)胞上黏附變化情況;應(yīng)用免疫印跡技術(shù)分析調(diào)控子宮內(nèi)膜β1，4-GalTⅠ表達(dá)對(duì)EGFR表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果:
　　 (1)子宮內(nèi)膜β1，4-GalT-Ⅰ表達(dá)與雌、

4、孕激素呈劑量、時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系，雌激素最佳作用條件為10-4ug/ul、48h(P＜0.01)，孕激素最佳作用條件為10-4ug/ul、48h(P＜0.01);(2)子宮內(nèi)膜雌、孕激素可促進(jìn)JAR細(xì)胞對(duì)RL95-2細(xì)胞的黏附作用，黏附率:雌激素組(84.7±0.4％)、孕激素組(91.4±0.7％)、雌孕聯(lián)合組(88.0±0.9％)，均明顯高于正常組(78.3±0.7％)(P＜0.01)，以孕激素上調(diào)作用更為顯著;孕激素組、雌孕聯(lián)合組可明

5、顯上調(diào)子宮內(nèi)膜EGFR、NF-κB、ICAM-1和Galβ1-4GlcNAc的表達(dá)(P＜0.01);雌激素組、孕激素組、雌孕聯(lián)合組明顯上調(diào)β1，4-GalT-Ⅰ、EGF蛋白表達(dá)(P＜0.01);(3)孕激素作用下促進(jìn)子宮內(nèi)膜EGFR磷酸化水平(P＜0.01);(4)子宮內(nèi)膜細(xì)胞轉(zhuǎn)染β1，4-GalTⅠ基因調(diào)控質(zhì)粒后，JAR細(xì)胞在RL95-2細(xì)胞上的黏附率分別為:過(guò)表達(dá)組(90.5±1.3％)高于正常組(77.9±0.9％)、空載體組(7

6、9.0±1.9％)和干擾對(duì)照組(80.1±1.6％)，干擾組黏附率則顯著降低(55.2±0.6％)(P＜0.01);同時(shí)檢測(cè)到干擾組EGFR表達(dá)水平上調(diào)，過(guò)表達(dá)組無(wú)明顯變化(P＜0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 (1)雌、孕激素可調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜細(xì)胞β1，4-GalT-Ⅰ的表達(dá)（呈現(xiàn)時(shí)間、劑量依賴關(guān)系），促進(jìn)JAR細(xì)胞對(duì)RL95-2細(xì)胞的黏附作用;(2)孕激素可上調(diào)子宮內(nèi)膜細(xì)胞EGFR相關(guān)信號(hào)通路分子表達(dá)來(lái)調(diào)控胚胎著床。(3