綜合征型先天性心臟病與拷貝數(shù)變異遺傳學研究.pdf

1、第一章、中國漢族人群綜合癥型先天性心臟病CNV分析
　　 目的:探討中國漢族人群中拷貝數(shù)變異與綜合征型先天性心臟病的關系，發(fā)現(xiàn)其新的致病性拷貝數(shù)變異。同時盡可能的縮小拷貝數(shù)缺失或者重復的致病區(qū)間，尋找與先天性心臟病相關的候選致病基因。
　　 對象:2009年4月到2011年8月就診于中南大學湘雅二醫(yī)院小兒心臟外科的140例綜合征型先天性心臟病患兒。該140例患兒排除了常見的三體綜合征及GATA4，NKX2.5，TBX5和

2、TBX1基因突變。其中，男性患兒75例，女性患兒65例。
　　 方法:利用美國QIAGEN公司gDNA抽提試劑盒，按照其標準抽提流程對上述140例患兒進行全外周靜脈血gDNA抽提。利用美國illumina公司生產的Human660W-Quad及Human Omni1-quad芯片，采用Array-SNP高通量測序技術對這其進行全基因組CNVs分析。我們從中選出四例國內較少報道的綜合征型患兒gDNA樣本，利用美國Applied B

3、iosystems公司生產的ABI Stepone定量PCR儀實行SYBR(R) Green I嵌合熒光法實時定量PCR，并利用Applied Biosystems的StepOne Software v2.1軟件進行數(shù)據(jù)分析驗證芯片結果。
　　 結果:在140例綜合征型先天性心臟病患兒中共發(fā)現(xiàn)21個致病性CNVs，其發(fā)生比率約為15％。其中22q11.2微缺失9例，發(fā)生比率約為6.7％，在綜合征型先天性心臟病中最為常見。同時，發(fā)

4、現(xiàn)4例國內研究較少的綜合征型先天性心臟病致病性CNVs，包括13q33.1-34，17p11.2缺失各一例及2例11q24-25缺失。對其關鍵基因進行實施定量PCR，其結果發(fā)現(xiàn)這4個致病性CNVs中的關鍵基因拷貝數(shù)約為正常對照組的0.5倍，與芯片結果一致。
　　 結論:
　　 1）illumina公司生產的Human660W-Quad及Human Omni1-quad芯片可對綜合征型先天性心臟病患兒致病性CNVs進行快速

5、而準確的分析，并提供可靠的遺傳學信息;
　　 2)13q33.1-34缺失，17p11.2缺失及11q24-25為綜合征型先天性心臟病的致病性CNVs區(qū)間。
　　 第二章、先天心臟病相關致病基因突變篩查
　　 背景:利用美國illumina公司的高通量Array-SNP從140例綜合征型先天性心臟病篩選出21個致病性CNVs。從這21個致病性CNVs中選出EFNB2，ZFPM2/FOG2為先天性心臟病的候選致病基

6、因。
　　 目的:本研究旨在探討EFNB2，F(xiàn)OG2兩種候選基因與先天性心臟病的相關性。
　　 對象:2009年4月到2011年8月就診于中南大學湘雅二醫(yī)院小兒心臟外科的孤立型先天性心臟病患兒。從中選出孤立型房間隔缺損15例，室間隔缺損15例，完全性房室間隔缺損15例，共45例患者進行EFNB2基因突變篩選;右室雙出口患兒38例進行ZFPM2/FOG2基因突變篩選，上述83例孤立型先天性心臟病gDNA樣本已排除常見的GA

7、TA4，NKX2.5，TBX5，TBX1基因突變。
　　 方法:利用美國QIAGEN公司gDNA抽提試劑盒，按照其標準抽提流程對上述83例患兒進行外周靜脈血gDNA抽提。對EFNB2，ZFPM2/FOG2分別設計相應的特異性引物擴增，利用ABI公司BigDye Terminator v1.1測序試劑盒及其3100測序儀對其PCR擴增產物進行測序分析。
　　 結果:在38例孤立型右室雙出口中共發(fā)現(xiàn)5例ZFPM2/FOG2錯

8、意突變，其發(fā)生比率約為13.2％。其中c.G1015A(p.V339I)、c.G1831A(p.A611T)、c.A2209G(p.K737E)3例為新發(fā)的錯意突變，而另外兩例突變(c.A2107C(p.M703L)及c.C2665G(p.Q889E)）常見于先天性膈疝，目前在先天性心臟病中尚無報道。以上5種突變都未收錄于1000 genomes或者the Single Nucleotide Polymor Polymorphism數(shù)據(jù)