2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩86頁未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、本文主要從以下三個方面展開論述:
  第一部分 Mfn-1和Mfn-2在rVSMCs細(xì)胞周期中的表達(dá)差異
  研究目的:研究線粒體融合素基因-2與線粒體融合素基因-1在大鼠血管平滑肌細(xì)胞周期中的表達(dá)差異,旨在闡明對大鼠血管平滑肌細(xì)胞周期具有調(diào)控作用的線粒體融合素基因。
  方法:采用無血清培養(yǎng)基同步化24小時,無血清培養(yǎng)基同步化48小時后換用含10%血清的培養(yǎng)基再生長18小時,胸腺嘧啶核苷和諾考達(dá)唑先后作用12小時誘導(dǎo)

2、大鼠血管平滑肌細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期不同階段,分為兩組,其中一組PI染色后進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測,另一組提取細(xì)胞總蛋白后進(jìn)行Western Blot分析線粒體融合素基因-2、線粒體融合素基因-1和細(xì)胞周期依賴性激酶抑制劑p27、p21、pRb的表達(dá)。
  結(jié)果:流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,無血清培養(yǎng)基同步化24小時后,平均80.10%的大鼠血管平滑肌細(xì)胞進(jìn)入G0/G1期;無血清培養(yǎng)基同步化48小時后換用含10%血清的培養(yǎng)基再生長18小時后,平均61

3、.27%的大鼠血管平滑肌細(xì)胞進(jìn)入S期;胸腺嘧啶核苷和諾考達(dá)唑先后作用12小時后,平均75.06%的大鼠血管平滑肌細(xì)胞進(jìn)入G2/M期;處于正常生長周期中的大鼠血管平滑肌細(xì)胞G0/G1期、S期和G2/M期的細(xì)胞分布平均為51.36%,39.52%,9.12%,作為對照。Western Blot分析表明,G0/G1期線粒體融合素基因-2和細(xì)胞周期依賴性激酶抑制劑p27、p21的表達(dá)與對照組和G2/M期相比明顯升高(P<0.05),pRb的表達(dá)

4、降低;而線粒體融合素基因-1G0/G1期的表達(dá)與對照組相比,無明顯差異。
  結(jié)論:在大鼠血管平滑肌細(xì)胞G0/G1期線粒體融合素基因-2的表達(dá)明顯增高,而線粒體融合素基因-1的表達(dá)并無明顯變化,表明線粒體融合素基因-2對大鼠血管平滑肌的細(xì)胞周期具有調(diào)控作用。
  第二部分 rVSMCs細(xì)胞周期不同階段形態(tài)與代謝的變化
  研究目的:研究大鼠血管平滑肌細(xì)胞周期不同階段細(xì)胞器的形態(tài)改變和代謝變化。
  方法:將大鼠血

5、管平滑肌細(xì)胞阻滯于細(xì)胞周期的不同階段,采用激光共聚焦顯微鏡觀察經(jīng)MitoTracker Red染色的線粒體形態(tài)的變化;通過透射電子顯微鏡顯示線粒體超微結(jié)構(gòu)的改變、線粒體與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)毗鄰關(guān)系的變化以及自噬溶酶體的形成和積累過程;JC-1處理后運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測線粒體膜電位的變化;采用化學(xué)法葡萄糖檢測試劑盒、氨基酸檢測試劑盒、ATP比色測定試劑盒、NAD+/NADH定量檢測試劑盒和NADP+/NADPH定量檢測試劑盒檢測葡萄糖代謝、氨基酸代謝、

6、ATP代謝、NAD+/NADH和NADP+/NADPH的變化。
  結(jié)果:激光共聚焦顯微鏡觀察結(jié)果顯示,G0/G1期線粒體呈管網(wǎng)狀分布,而對照組以及S期線粒體呈散在的粒狀分布,G2/M期線粒體呈散在的團(tuán)狀分布;進(jìn)一步通過透射電子顯微鏡顯示G0/G1期線粒體與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的毗鄰關(guān)系更近,而且內(nèi)質(zhì)網(wǎng)甚至被拉向線粒體;S期線粒體與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分離,而且線粒體腫脹、嵴斷裂,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)池擴(kuò)張;G2/M期線粒體數(shù)量減少,出現(xiàn)大量的自噬溶酶體。流式細(xì)胞術(shù)檢測表

7、明,從G0/G1期至G2/M期線粒體膜電位明顯下降(P<0.05)。采用化學(xué)法檢測發(fā)現(xiàn),葡萄糖代謝、氨基酸代謝、ATP代謝和NADP+/NADPH在整個細(xì)胞周期中并未明顯變化,NAD+含量在G0/G1期明顯降低(P<0.05)。
  結(jié)論:盡管在大鼠血管平滑肌細(xì)胞的整個細(xì)胞周期中,葡萄糖、氨基酸和ATP代謝無顯著改變,但是在大鼠血管平滑肌細(xì)胞G0/G1期,當(dāng)線粒體融合素基因-2表達(dá)升高時,線粒體密集呈管網(wǎng)狀分布,且內(nèi)質(zhì)網(wǎng)被拉向線粒

8、體,NAD+含量明顯降低;而在大鼠血管平滑肌細(xì)胞G2/M期,當(dāng)線粒體融合素基因-2含量降低時,線粒體膜電位急劇下降,伴隨大量的自噬溶酶體形成。
  第三部分 Mfn-2對rVSMCs線粒體重塑的影響
  目的:研究過表達(dá)線粒體融合素基因-2對大鼠血管平滑肌細(xì)胞線粒體形態(tài)變化的影響。
  方法:構(gòu)建Mfn-2的腺病毒載體Adv-Mfn-2-S442A,采用Adv-Mfn-2-S442A的不同感染復(fù)數(shù)25pfu/細(xì)胞和50

9、pfu/細(xì)胞感染血管平滑肌細(xì)胞24小時后,激光共聚集顯微鏡觀察MitoTracker Red染色后線粒體形態(tài)的變化。
  結(jié)果:成功構(gòu)建Mfn-2的腺病毒載體Adv-Mfn-2-S442A;Adv-Mfn-2-S442A以感染復(fù)數(shù)25pfu/細(xì)胞感染血管平滑肌細(xì)胞24小時后,激光共聚集顯微鏡顯示MitoTracker Red染色的線粒體在細(xì)胞漿內(nèi)呈散在團(tuán)狀分布;Adv-Mfn-2-S442A以不同感染復(fù)數(shù)50pfu/細(xì)胞感染血管平

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論