透鈣磷石涂層摻鍶對ME3T3-E1細(xì)胞的增殖、分化影響.pdf

1、目的：通過研究鈦表面沉積的透鈣磷石涂層的理化特性，以及在鈦-透鈣磷石復(fù)合材料中摻入不同含量的鍶以后對小鼠胚胎前成骨細(xì)胞（MC3T3-E1）的毒性、增殖、分化以及相關(guān)基因表達(dá)變化的影響進(jìn)行對比研究，探討鈦-透鈣磷石復(fù)合材料成為新的骨組織植入材料的可行性，以及鍶的加入能否更好的協(xié)助透鈣磷石發(fā)揮成骨作用，提高生物學(xué)性能，進(jìn)而為植體材料開辟新思路，同時也為以后體內(nèi)試驗(yàn)及臨床應(yīng)用提供參考數(shù)據(jù)。
　　方法：1、采用電化學(xué)沉積法在鈦片表面制備C

2、a-P涂層，通過能量分散譜（EDS）和X射線衍射（XRD）分析涂層組成成分，通過掃描電子顯微鏡（SEM）觀察材料表面的微觀形貌。2、培養(yǎng)MC3T3-E1細(xì)胞，并通過Giemsa染色，顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)。3、采用浸提液試驗(yàn)進(jìn)行細(xì)胞毒性檢測，用 CCK-8試劑盒檢測鈦組、摻不同濃度鍶的透鈣磷石組對前成骨細(xì)胞的毒性和增殖情況。4、鈦、透鈣磷石涂層、1％摻鍶組材料與MC3T3-E1細(xì)胞體外復(fù)合培養(yǎng)，觀察細(xì)胞在材料表面的附著、形態(tài)、增殖情況

3、，研究其生物相容性。5、堿性磷酸酶活性（ALP）試劑盒定量檢測成骨細(xì)胞中ALP的表達(dá)含量。6、茜素紅進(jìn)行細(xì)胞鈣化結(jié)節(jié)染色。7、實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)檢測分析不同含鍶量的透鈣磷石涂層材料對成骨細(xì)胞中骨形態(tài)生成蛋白（BMP-2）及Ⅰ型膠原蛋白（COL-Ⅰ）表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：1、電化學(xué)沉積法所制備的涂層Ca、P比例為1:1，主要成分為透鈣磷石（brushite）；SEM觀察可見涂層表面凹凸不平，晶體致密，呈菜花樣，較鈦表面更為不平

4、整。2、MC3T3-E1細(xì)胞系屬于貼壁生長型細(xì)胞，顯微鏡下貼壁的細(xì)胞形態(tài)呈梭形、不規(guī)則三角形或多邊形，各個突起彼此伸展連接，胞核較圓，細(xì)胞聚集過密時可以重疊生長。3、CCK-8法細(xì)胞毒性檢測顯示：實(shí)驗(yàn)組毒性等級均低于2級，其中0.5%、1%、5%摻鍶組與其他各組間吸光度值存在顯著性差異（P＜0.05），且隨培養(yǎng)時間的延長而增長。4、MC3T3-E1細(xì)胞在涂層材料上粘附鋪展良好，沒有發(fā)生細(xì)胞皺縮、變圓、脫壁等形態(tài)改變，SEM可見細(xì)胞長入材

5、料凹孔內(nèi)，隨鍶的摻入，細(xì)胞生長密集，相互融合嵌入涂層表面。5、含鍶涂層上的細(xì)胞有較高水平的ALP表達(dá)，透鈣磷石組在培養(yǎng)14天時細(xì)胞中ALP的活性顯著高于純鈦上培養(yǎng)的細(xì)胞（P＜0.05）。6、成骨細(xì)胞礦化結(jié)節(jié)染色可見含鍶組結(jié)節(jié)形成的數(shù)目增多，時間縮短。7實(shí)驗(yàn)組中骨誘導(dǎo)相關(guān)特征基因BMP-2的表達(dá)水平明顯高于對照組培養(yǎng)的細(xì)胞（P＜0.05）；分化成熟標(biāo)志基因COL-Ⅰ在摻鍶組中的表達(dá)高于對照組。
　　結(jié)論：1、透鈣磷石涂層及鍶的摻入對