利用腸癌特異性A33啟動子介導的溶瘤病毒拾腸癌特異的抑癌基因ST13靶向基因病毒治療結(jié)腸癌研究.pdf

1、)；j{浙江理工大學學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：我恪守學術(shù)道德，崇尚嚴謹學風。所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已明確注明和引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品及成果的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫，我對所寫的內(nèi)容負責，并完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔。學位論文作者簽名：日期： 年 月 日浙江理工大學碩士學位論文利用腸癌特異性A 3 3 啟動子介導的溶瘤病毒攜帶

2、腸癌特異的抑癌基因S T l 3 靶向基因病毒治療結(jié)腸癌研究摘要結(jié)腸癌在我國的發(fā)病率有逐年上升趨勢，目前的傳統(tǒng)治療方法對不能手術(shù)切除的結(jié)腸癌效果欠佳，因此，積極探索新的結(jié)腸癌治療方法具有重要意義。癌癥的靶向基因．病毒治療策略( c a n c e r t a r g e t i n gG e n e - v i r o - t h e r a p y ) 已經(jīng)成為一個研究熱點。目前，實現(xiàn)腫瘤基因．病毒的靶向性治療主要是通過腫瘤組織特異性

3、的啟動子來調(diào)控病毒載體或治療基因，從而使得重組基因．病毒對細胞的殺傷具有腫瘤選擇性。G P A 3 3 ( g l y c o p r o t e i n A 3 3 ，A 3 3 ) ，是一個4 3k D a 大小的跨膜糖蛋白，H e a t h 等在1 9 9 7 年發(fā)現(xiàn)其在9 5 ％以上的原發(fā)和轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌中過表達，且N o r t h e r n b l o t 分析顯示2 ．8K b 大小的A 3 3 m R N A 只有在結(jié)腸

4、癌細胞系中顯示A 3 3 抗原陽性，在其他組織中幾乎沒有表達。因此將糖蛋白A 3 3 基因的啟動子應用于靶向基因．病毒治療平臺，可能具有極好的結(jié)腸癌組織特異性。在本研究中，首先通過構(gòu)建A 3 3 核心啟動子和帶S V 4 0 增強子的A 3 3 核心啟動子( e A 3 3 ) 的熒光素酶報告基因載體p G L 3 ．A 3 3 和p G L 3 - e A 3 3 ，與內(nèi)參照p R L ．S V 4 0 質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至不同的細胞系中，利

5、用雙熒光素酶檢測系統(tǒng)檢測分析了A 3 3 和e A 3 3 啟動子在不同細胞系中的轉(zhuǎn)錄活性。結(jié)果顯示，A 3 3 核心啟動子在結(jié)腸癌細胞系中具有轉(zhuǎn)錄活性低但結(jié)腸癌特異性好的特點，而在其他類型癌細胞中基本沒有活性。同時發(fā)現(xiàn)，e A 3 3 在各類癌細胞中的轉(zhuǎn)錄水平與A 3 3 相比，均呈大幅度提高，有顯著性差異( P < 0 ．0 1 ) ，但S V 4 0 增強子能顯著增強A 3 3 啟動子轉(zhuǎn)錄活性的同時減低了其結(jié)腸癌特異性。因而

6、我們選擇了A 3 3 核心啟動子構(gòu)建重組病毒，使用結(jié)腸癌特異性A 3 3 啟動子代替病毒E 1 A 基因的啟動子，刪除病毒E 1 B 蛋白基因，構(gòu)建出結(jié)腸癌特異性增殖腺病毒載體A d ．A 3 3 ．E 1 A ．A E l B ，期望達到雙重靶向殺傷結(jié)腸癌細胞，并提高其對正常細胞的安全性的治療效果。治療基因的選擇是腫瘤的靶向基因．病毒治療取得成功的關(guān)鍵之一。為增強溶瘤腺病毒對腫瘤細胞的殺傷達到更佳效果，我們利用S T l 3 ( s