人參皂甙Rb1聯(lián)合磷酸川芎嗪對(duì)擴(kuò)張型心肌病的治療作用及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分人參皂甙Rb1聯(lián)合磷酸川芎嗪對(duì)擴(kuò)張型心肌病的治療作用及機(jī)制研究
　　 目的：擴(kuò)張型心肌病(dilated cardiomyopathy,DCM)以左心室或雙心室擴(kuò)張和心功能減退為特征,其發(fā)病原因與病毒感染、自身免疫、酒精中毒、妊娠、家族遺傳等因素有關(guān),其人群發(fā)病率約為1/2500,占所有心肌病的60％。迄今缺乏有效治療,是心血管疾病的重要死因。為尋找安全高效的治療DCM的藥物,我們把作用于不同靶點(diǎn)的中藥單體人參皂甙Rb1

2、(Ginsenoside-Rb1,Rb1)和磷酸川芎嗪(Tetramethylpyrazine phosphate,TMPP)聯(lián)合應(yīng)用,以本室建立的cTnTR141W擴(kuò)張型心肌病轉(zhuǎn)基因小鼠為模型,研究本中藥單體復(fù)方對(duì)DCM的治療效果并探討其作用機(jī)理。
　　 方法：對(duì)2.5月齡的cTnTR141W轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行心臟超聲檢查,計(jì)算左心室收縮末期內(nèi)徑(the left ventricular end-systole diameter,

3、LVESD)的平均值和95％的可信區(qū)間。我們將95％的可信區(qū)間的上限作為心臟擴(kuò)張的標(biāo)準(zhǔn),將LVESD值于95％可信區(qū)間內(nèi)的轉(zhuǎn)基因小鼠隨機(jī)分成七組:模型對(duì)照組,Rb1(40 mg/kg/day)+TMPP(20 mg/kg/day)聯(lián)合組1,Rb1(40mg/kg/day)+TMPP(40mg/kg/day)聯(lián)合組2,Rb1(20mg/kg/day)+TMPP(40 mg/kg/day)聯(lián)合組3,Rb1(40mg/kg/day)組,TMP

4、P(40mg/kg/day)組,陽性對(duì)照組[卡托普利(180mg/kg/day)],用同齡的陰性鼠作為正常對(duì)照組。各組小鼠連續(xù)給藥2個(gè)月并且于2.5,3.5及4.5月齡時(shí)進(jìn)行超聲檢查。在給藥終點(diǎn)即4.5月齡時(shí),進(jìn)行Kaplan-Meier生存分析,同時(shí)各組部分小鼠心臟組織取材,進(jìn)行H&E染色和Masson染色觀察心肌顯微結(jié)構(gòu)變化,透射電鏡觀察心肌超微結(jié)構(gòu),RT-PCR(reverse transcription PcR)檢測Ⅰ型膠原(C

5、OL1α1),Ⅲ型膠原(COL3α1),鈣調(diào)素1(Calm1),鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶Ⅱ b(Camk2b)的表達(dá),Westernblot檢測心臟HB-EGF表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：根據(jù)4.5月齡時(shí)死亡率及超聲分析結(jié)果,聯(lián)合應(yīng)用組1,即Rb1(40mg/kg/day)+TMPP(20mg/kg/day)組(Rb+TMPP),對(duì)模型小鼠擴(kuò)心表型改善最好,與Rb1和TMPP單方治療組相比,Rb1+TMPP組在心肌細(xì)胞排列,間質(zhì)纖維化

6、及心肌超微結(jié)構(gòu)方面具有更好的改善作用。RT-PCR和Western blot檢測結(jié)果顯示與Rb1及TMPP單方相比,Rb1+TMPP組可同時(shí)抑制COL1α1,COL3α1,Calm1,Camk2b和HB-EGF的表達(dá),而Rb1治療組主要抑制HB-EGF的表達(dá),TMPP治療組主要抑制Calm1和Camk2b的表達(dá)。
　　 結(jié)論：與Rb1及TMPP單方相比,Rb1與TMPP聯(lián)合應(yīng)用在改善模型小鼠死亡率,心室擴(kuò)張,收縮功能失調(diào),間質(zhì)纖