苦參素對單側(cè)輸尿管梗阻大鼠腎臟間質(zhì)纖維化的影響及機(jī)制研究.pdf

1、慢性腎臟疾病(chronickidneydisease,CKD)的進(jìn)展是一個不可逆轉(zhuǎn)的過程，最終導(dǎo)致終末期腎病(endstagerenaldisease，ESRD)。腎間質(zhì)纖維化(renalinterstitialfibrosis，RIF)幾乎是所有腎臟疾病進(jìn)展到終末期腎功能衰竭的共同病理途徑。大量動物和臨床試驗(yàn)表明，腎功能的惡化趨勢取決于腎小管間質(zhì)損傷的程度和范圍。腎小管間質(zhì)病變程度是反映腎功能下降嚴(yán)重程度和判斷預(yù)后最重要的指標(biāo)。目前

2、全世界罹患終末期腎功能衰竭的患者以每年7％的速度遞增，給家庭及社會帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。進(jìn)一步研究腎間質(zhì)纖維化的分子機(jī)制，探索有效的防治措施，對延緩ESRD的進(jìn)程，延長患者壽命意義重大。 苦參素(Kushenin)是一類主要成分為氧化苦參堿的化合物，主要從苦參根及苦豆子中提取。近年來，藥理及臨床研究發(fā)現(xiàn)苦參素除具有抗炎，抗病毒，抗癌，升高白細(xì)胞及護(hù)肝降酶的作用外，還具有抑制成纖維細(xì)胞增殖及膠原合成，減輕炎性細(xì)胞浸潤，防治試驗(yàn)性大

3、鼠肝纖維化的作用。苦參素對腎間質(zhì)炎癥和腎間質(zhì)纖維化的作用如何目前并不清楚。本研究通過對大鼠進(jìn)行單側(cè)輸尿管結(jié)扎(unilateralureteralobstruction，UUO)，建立腎間質(zhì)纖維化模型，動態(tài)觀察苦參素對梗阻側(cè)腎臟的病理改變及生化指標(biāo)的影響，用RT-PCR法測定梗阻側(cè)腎組織TGF-β1，α-SMAmRNA的水平，用免疫組化法觀察腎組織TGF-β1、Smad3、α-SMA、ColⅠ的表達(dá)，用Western雜交分析法檢測TGF

4、-β1、α-SMA蛋白表達(dá)情況，以探討苦參素對腎間質(zhì)纖維化的影響及可能機(jī)制，為臨床防治腎間質(zhì)纖維化尋找新的途徑。 第一部分:苦參素對單側(cè)輸尿管結(jié)扎大鼠腎臟病變的影響 目的:觀察苦參素對單側(cè)輸尿管結(jié)扎大鼠腎臟病變的影響。 方法:雄性SD大鼠隨機(jī)分為3組：假手術(shù)組，單側(cè)輸尿管結(jié)扎(UUO)組，苦參素治療組。假手術(shù)組僅游離左側(cè)輸尿管后即縫合皮膚，UUO組和苦參素治療組進(jìn)行左側(cè)輸尿管雙結(jié)扎，治療組在UUO的基礎(chǔ)上每天以苦

5、參素100mg/Kg腹腔注射。假手術(shù)組，UUO組和苦參素治療組于術(shù)后第7，14，21，28天分別處死5只大鼠。處死前一天收集24h尿液，處死當(dāng)天收集靜脈血及腎組織標(biāo)本。測定左腎重/體重，用全自動生化分析儀檢測TP,ALB，BUN，Scr及24h尿蛋白定量。腎組織行PAS及Masson染色，光鏡下觀察腎臟病理改變。采用百分比評分法評估腎小管損害程度及腎間質(zhì)纖維化程度，計算×400HP下炎性細(xì)胞計數(shù)。用免疫組化法觀察腎臟Ⅰ型膠原的沉積。

6、 結(jié)論:苦參素可顯著減輕UUO大鼠梗阻側(cè)腎臟炎性細(xì)胞浸潤，下調(diào)Ⅰ型膠原的表達(dá)，減少腎小管損害和腎間質(zhì)纖維化的程度，對梗阻腎臟具保護(hù)作用。 第二部分:苦參素對單側(cè)輸尿管結(jié)扎大鼠腎臟TGF-β1、Smad3及α-SMA表達(dá)的影響 目的:通過測定梗阻側(cè)腎臟TGF-β1、Smad3及α-SMA的表達(dá)對苦參素減輕腎間質(zhì)纖維化的機(jī)理進(jìn)行初步探討。 方法:雄性SD大鼠隨機(jī)分為3組：假手術(shù)組，單側(cè)輸尿管結(jié)扎(UUO)組，苦參

7、素治療組。假手術(shù)組僅游離左側(cè)輸尿管后即縫合皮膚，UUO組和苦參素治療組進(jìn)行左側(cè)輸尿管雙結(jié)扎。治療組在UUO的基礎(chǔ)上每天以苦參素100mg/Kg腹腔注射。假手術(shù)組，UUO組和苦參素治療組于術(shù)后第7，14，21，28天分別處死5只大鼠。用RT-PCR法測定腎組織TGF-β1，α-SMAmRNA水平，用免疫組化法觀察腎組織TGF-β1、Smad3及α-SMA的表達(dá)，Western雜交分析法檢測TGF-β1、α-SMA蛋白表達(dá)情況。 結(jié)